替莫唑胺（TMZ）是抗膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的首選化療藥物,但腫瘤對(duì)TMZ的化療耐藥性限制了其臨床應(yīng)用。盡管自噬被認(rèn)為與化療耐藥及化療下細(xì)胞存活的適應(yīng)性應(yīng)答相關(guān),但其精確的分子機(jī)制仍不清楚。在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)替莫唑胺增加TRPC5表達(dá)并上調(diào)基礎(chǔ)自噬水平,而且神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中自噬水平的上調(diào)是由TRPC5介導(dǎo)的。同時(shí),TRPC5的敲除在體外和體內(nèi)均上調(diào)膠質(zhì)瘤細(xì)胞對(duì)化療的敏感性。此外,我們采用TRPC5-siRNA和藥物抑制證實(shí)CaMKKβ/AMPKα/mTOR通路在替莫唑胺治療期間可介導(dǎo)自噬使細(xì)胞存活。而且具有替莫唑胺耐藥性的U87細(xì)胞系保持著高基礎(chǔ)自噬水平,而TRPC5敲除或是自噬被抑制的U87細(xì)胞系對(duì)替莫唑胺抗性降低�？傊�,我們的研究揭示了TRPC5可作為激活自噬的起始因子,通過(guò)CaMKKβ/AMPKα/mTOR途徑上調(diào)膠質(zhì)瘤細(xì)胞對(duì)TMZ的抗性,提示TRPC5可作為膠質(zhì)瘤化療中抗藥性的新治療靶點(diǎn)。 

【文章來(lái)源】：南京醫(yī)科大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：42 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

TMZ上調(diào)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中TRPC5的表達(dá)和自噬水平（A）用400nMTMZ處理神經(jīng)膠質(zhì)瘤U87/WT細(xì)胞48小時(shí)，通過(guò)免疫印跡分析TRPC5和LC3的蛋白質(zhì)表達(dá)

12圖 2.TRPC5 促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中 TMZ 誘導(dǎo)的自噬（A）用 TRPC5-siRNA 或 control-siRNA 轉(zhuǎn)染 U87/WT 細(xì)胞 24 小時(shí)，然后用 TMZ 處理 48小時(shí)。通過(guò) Fura-2 AM 法測(cè)定轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度。通過(guò)免疫印跡分析 LC3 的蛋

南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文白水平表達(dá)。結(jié)果表明 TRPC5-siRNA 降低細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度及 LC3-II 的蛋白表達(dá)。（B）免疫熒光圖像顯示 TRPC5-siRNA 降低 U87/WT 細(xì)胞中平均每個(gè)細(xì)胞的 LC3 數(shù)量。（C）用TRPC5-siRNA 或 control-siRNA 轉(zhuǎn)染 U87/TMZ 細(xì)胞 24 小時(shí)，然后用 TMZ 處理 48 小時(shí)。通過(guò)免疫印跡分析 LC3 的蛋白水平表達(dá)。結(jié)果表明 TRPC5-siRNA 降低 U87/TMZ 細(xì)胞 LC3-II的蛋白表達(dá)。（D 和 E）用 TRPC5 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染 U87/WT 細(xì)胞，通過(guò) Fura-2 AM 法測(cè)定轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度。通過(guò)免疫印跡分析 LC3 的蛋白水平表達(dá)。結(jié)果表明 TRPC5 過(guò)表達(dá)上調(diào)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度及 LC3-II 的蛋白表達(dá)。免疫熒光圖像顯示 TRPC5 過(guò)表達(dá)上調(diào)U87/WT 細(xì)胞中平均每個(gè)細(xì)胞的 LC3 數(shù)量。


本文編號(hào)：3481019