發(fā)布時間：2021-11-03 20:17

　　癲癇是最常見的神經(jīng)系統(tǒng)疾病之一,其發(fā)病機制非常復(fù)雜,至今尚未研究透徹。為了研究癲癇的發(fā)病機制,動物模型被廣泛應(yīng)用,但是動物模型的癲癇生理和人類不同,給應(yīng)用帶來了一定的限制。多能誘導(dǎo)干細胞（iPSCs）具備胚胎干細胞（ESCs）體外高度增殖和多向分化的能力,并且由患者成體細胞重編程獲得的iPSC與供體保留著相同的遺傳背景,同時解決了ESCs的來源問題,因此在再生醫(yī)學(xué)和細胞替代治療領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用前景。目前,已經(jīng)有將iPSCs技術(shù)應(yīng)用于神經(jīng)系統(tǒng)疾病的報道,特別是一些神經(jīng)退行性疾病和神經(jīng)發(fā)育異常性疾病,例如帕金森病、阿爾茨海默病和進行性脊髓性肌萎縮癥等,但是將iPSCs技術(shù)應(yīng)用于癲癇尚未見報道。不同類型的體細胞誘導(dǎo)分化為iPS細胞的效率有所不同,iPSCs也存在錯誤表達來源體細胞胚層的信息的風險,因此利用神經(jīng)祖細胞獲得iPSCs較為理想,但是利用神經(jīng)外胚層細胞獲得iPSCs的研究尚缺乏。本課題將分為三部分研究通過將癲癇患者來源的神經(jīng)祖細胞重編程為特異性的iPSCs,這些細胞可以大量擴增,將其分化神經(jīng)細胞后,我們通過分析其電生理特征,對候選的GABRG2基因進行分析,將這些具有特異性的iPS... 

【文章來源】：復(fù)旦大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：114 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

原代神經(jīng)祖:.ffl胞A、培養(yǎng)15天形成的原代神經(jīng)球50x;B、培養(yǎng)15天形成的原代神經(jīng)球200>.

■Mm圖2: iPS細胞的鏡下觀察A、原代iPS集落50X，轉(zhuǎn)染第18天左右，原代iPS克隆幵始形成，鏡下可見直徑約為15um的有核細胞，細胞核較大，細胞與周圍組織邊界清晰，細胞周邊有折光性較強的脂質(zhì)小滴；B、第五代集落50X，培養(yǎng)至第五代iPS克隆時，可見形成的iPS細胞克隆邊界更加清晰

我們?nèi)〔糠謎PS細胞克隆進行堿性憐酸酶染色，由神經(jīng)祖細胞和成纖維細胞來源的iPS細胞克隆均呈棕紅色（圖3)，說明獲得的iPS細胞克隆處于未分化狀態(tài)。而運用免疫勞光技術(shù)檢測iPS細胞克隆，人未分化ES細胞特異性標志0CT4、S0X2、SSEA-4和TRA-1 -81等免疫勞光染色均呈高表達狀態(tài)。；鐘：圖3: iPS細胞第五代集落以及AP染色A、第五代集落200X (接種第一天)；B、第五代集落AKP染色50X ,兩種組織來源的iPS細胞AP染色均呈現(xiàn)特征性的紅色。Figure 3: iPS cells fifth-generation clones and AP staining. A，The fifth-generationclones 200x (The first day of inoculation) ； B, The AKP staining to the fifthgeneration clones 50x，two kinds of organizations source of iPS cells AP stainingshowed a characteristic red .4、畸胎瘤生成實驗iPS注入小鼠肌肉中9周后，注射部位可見直徑約2?4cin大小的腫塊形成，成纖維細胞和祌經(jīng)祖細胞來源的iPS細胞形成畸胎瘤的能力相仿。將其分離后，利用4%的多聚甲酵固定

【參考文獻】：
期刊論文
[1]GABRG2基因多態(tài)性在GEFS+中分布的研究[J]. 孟海嬌,洪震,朱國行,羅玉敏,任惠民.  神經(jīng)疾病與精神衛(wèi)生. 2003(06)



本文編號：3474284