本文關(guān)鍵詞：神經(jīng)降壓素NTS及其受體NTSR1對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的影響及其分子機(jī)制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：惡性膠質(zhì)瘤是具有高度侵襲性和致死性的顱內(nèi)原發(fā)性腫瘤,約占成人顱內(nèi)原發(fā)惡性腫瘤的80%。盡管近年來(lái)綜合治療策略(聯(lián)合手術(shù)、放療和化療)在臨床中的廣泛運(yùn)用并取得了一定效果,但多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(glioblastoma multiforme,GBM)患者的中位生存期仍然少于15個(gè)月。惡性增殖是膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生物學(xué)特點(diǎn)之一,導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞惡性增殖的重要原因是腫瘤細(xì)胞基因組的不穩(wěn)定和功能基因組的異常表達(dá)。因此,深入探討膠質(zhì)細(xì)胞增殖和腫瘤生長(zhǎng)的分子機(jī)制將有助于解釋其惡性增殖現(xiàn)象。神經(jīng)降壓素(neurotensin,NTS)是由13個(gè)氨基酸殘基組成的直鏈多肽,作為神經(jīng)遞質(zhì)和激素樣神經(jīng)肽廣泛分布并作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)和消化系統(tǒng)。研究發(fā)現(xiàn),神經(jīng)降壓素和高親和力受體1(neurotensin receptor 1,NTSR1)在多種腫瘤的病理進(jìn)程中發(fā)揮了重要作用。因此,NTS/NTSR1有望成為腫瘤治療的潛在靶點(diǎn),但目前尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道NTS/NTSR1在惡性膠質(zhì)瘤中的生物學(xué)效應(yīng)及其分子機(jī)制。微小RNA(micro RNAs,mi RNAs)是一類內(nèi)源性、短鏈、高度保守的非編碼RNA。mi RNAs和相應(yīng)蛋白形成RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物(RNA-induced silencing complex,RISC),RISC作用于靶點(diǎn)mRNA的3端非轉(zhuǎn)錄區(qū),以轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)方式抑制靶點(diǎn)mRNA翻譯成蛋白質(zhì)或降解該mRNA。生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)人體約有30%-60%基因的表達(dá)受到微小RNA的調(diào)控,其中包括眾多細(xì)胞周期調(diào)控因子。本研究采用體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)觀察NTS/NTSR1、mi RNAs和c-Myc對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期和移植瘤生長(zhǎng)的影響;采用miRNAs芯片、熒光定量PCR和染色質(zhì)免疫共沉淀(Ch IP)實(shí)驗(yàn)論證NTS/NTSR1如何調(diào)控miRNAs的表達(dá);采用熒光素酶報(bào)告基因和正反論證法觀察mi RNAs和CDKs之間的關(guān)聯(lián);采用western blot、熒光定量PCR和正反論證法探討NTS/NTSR1如何調(diào)控CDK4的表達(dá)。旨在探討NTS/NTSR1在膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖中的生物學(xué)作用及其分子機(jī)制,為研究控制膠質(zhì)瘤生長(zhǎng)和改善患者預(yù)后提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和新的治療靶點(diǎn)。主要結(jié)果:1.NTS/NTSR1促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、G1/S期進(jìn)展和皮下移植瘤生長(zhǎng)NTS在體外具有促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和G1/S期進(jìn)展的能力,而使用NTSR1的特異性拮抗劑SR48692或si NTSR1可以顯著逆轉(zhuǎn)NTS對(duì)細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期進(jìn)展的促進(jìn)作用;沉默膠質(zhì)瘤細(xì)胞NTSR1的表達(dá)可以顯著抑制皮下移植瘤的生長(zhǎng);NTS/NTSR1對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的影響主要通過(guò)調(diào)控G1/S期進(jìn)展而不是通過(guò)影響細(xì)胞凋亡;NTS/NTSR1對(duì)G1/S期進(jìn)展的促進(jìn)作用主要通過(guò)在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)CDK6的表達(dá),在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)節(jié)CDK4表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)。2.NTS/NTSR1通過(guò)c-Myc/mi R-29b-1和miR-129-3p調(diào)節(jié)CDK6蛋白的表達(dá)NTS/NTSR1抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞中mi R-29b-1和miR-129-3p的表達(dá),這兩個(gè)mi RNAs均可以作用于CDK6 mRNA的3端非轉(zhuǎn)錄區(qū)并抑制CDK6蛋白的表達(dá);NTS/NTSR1通過(guò)促進(jìn)轉(zhuǎn)錄因子c-Myc的表達(dá)繼而作用于mi R-29b-1的啟動(dòng)子并抑制其表達(dá)。3.NTS/NTSR1通過(guò)轉(zhuǎn)錄因子c-Myc在轉(zhuǎn)錄水平促進(jìn)CDK4的表達(dá)NTS促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄因子c-Myc的表達(dá),該過(guò)程需要NTSR1的參與;轉(zhuǎn)錄因子c-Myc通過(guò)和CDK4的啟動(dòng)子結(jié)合繼而促進(jìn)CDK4的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。4.mi R-29b-1、mi R-129-3p和轉(zhuǎn)錄因子c-Myc影響膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、G1/S期進(jìn)展、顱內(nèi)原位移植瘤生長(zhǎng)和荷瘤裸鼠生存時(shí)間mi R-29b-1和miR-129-3p抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和G1/S期進(jìn)展;在U87-NTSR1-SH細(xì)胞中干擾miR-29b-1和miR-129-3p的功能可以恢復(fù)顱內(nèi)原位移植瘤的生長(zhǎng);在U87-NTSR1-SH細(xì)胞中過(guò)表達(dá)c-Myc或干擾mi RNAs的功能均可以促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和G1/S期進(jìn)展,兩者聯(lián)合運(yùn)用具有協(xié)同促進(jìn)作用。綜上所述,NTS/NTSR1可以在體外促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和G1/S期進(jìn)展,在體內(nèi)促進(jìn)腫瘤組織的生長(zhǎng),而沉默NTSR1可以逆轉(zhuǎn)上述現(xiàn)象;NTS/NTSR1通過(guò)抑制mi R-29b-1和mi R-129-3p表達(dá)繼而解除這兩個(gè)mi RNAs對(duì)CDK6蛋白表達(dá)的抑制作用;NTS/NTSR1通過(guò)促進(jìn)c-Myc表達(dá)一方面抑制miR-29b-1的表達(dá),另一方面促進(jìn)CDK4的轉(zhuǎn)錄;NTS/NTSR促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、G1/S期進(jìn)展和腫瘤生長(zhǎng)需要miRNA/CDKs軸和c-Myc/CDKs軸的參與。
【關(guān)鍵詞】：膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 神經(jīng)降壓素 微小RNA 細(xì)胞周期
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.41
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表5-7
• 英文摘要7-10
• 中文摘要10-12
• 第一章 前言12-18
• 1.1 選題緣由12-13
• 1.2 研究背景13-15
• 1.3 研究意義15
• 1.4 研究?jī)?nèi)容15-16
• 1.5 研究方法16-18
• 第二章 NTS/NTSR1促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞周期進(jìn)展，細(xì)胞增殖和腫瘤生長(zhǎng)18-40
• 2.1 材料和方法18-28
• 2.2 結(jié)果28-37
• 2.3 討論37-39
• 2.4 小結(jié)39-40
• 第三章 NTS/NTSR1通過(guò)miRNA/CDKs和c-Myc/CDKs機(jī)制調(diào)控CDK4/6 的表達(dá)40-66
• 3.1 材料和方法41-53
• 3.2 結(jié)果53-63
• 3.3 討論63-65
• 3.4 小結(jié)65-66
• 第四章 NTS/NTSR1-mi RNAs和NTS/NTSR1-Myc共同影響62膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖活力66-82
• 4.1 材料和方法66-74
• 4.2 結(jié)果74-80
• 4.3 討論80-81
• 4.4 小結(jié)81-82
• 全文總結(jié)82-84
• 參考文獻(xiàn)84-93
• 文獻(xiàn)綜述 micro RNAs調(diào)控惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞周期的研究進(jìn)展93-100
• 參考文獻(xiàn)97-100
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果100-101
• 致謝101

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 歐陽(yáng)慶;神經(jīng)降壓素NTS及其受體NTSR1對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的影響及其分子機(jī)制[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

  本文關(guān)鍵詞：神經(jīng)降壓素NTS及其受體NTSR1對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的影響及其分子機(jī)制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：346531