第一部分：Clusterin基因沉默對(duì)人腦膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞增殖、凋亡與侵襲性的影響目的：研究通過(guò)慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù)沉默簇集蛋白（clusterin，CLU）的基因表達(dá)后，人腦膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞的增殖、侵襲及凋亡等生物學(xué)行為將會(huì)受到怎樣的影響。方法：設(shè)計(jì)和合成靶向CLU的shRNA序列，并構(gòu)建到慢病毒的載體plentilox3.7，包被能成功表達(dá)各種shRNA載體的慢病毒。將慢病毒感染人腦膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞，Real time-PCR檢測(cè)CLU、MMP-2和TIMP-2基因mRNA水平，Western Blot技術(shù)檢測(cè)CLU蛋白表達(dá)水平；運(yùn)用MTT法、流式細(xì)胞儀Annexin V/PI及Transwell體外侵襲實(shí)驗(yàn)法評(píng)價(jià)檢測(cè)CLU沉默后，對(duì)人腦膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞在增殖、凋亡及侵襲能力等方面所造成的影響。結(jié)果：特異性針對(duì)CLU基因全長(zhǎng)mRNA的短發(fā)夾RNA（shRNA）在經(jīng)過(guò)慢病毒包裝后成功感染U87細(xì)胞，并在mRNA和蛋白水平上對(duì)CLU基因表達(dá)產(chǎn)生了特異性的抑制作用；通過(guò)MTT結(jié)果證實(shí)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞在sCLU表達(dá)受到干擾后，其增殖明顯受抑，與各對(duì)照組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0... 

【文章來(lái)源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Real-timePCR測(cè)sCLU的mRNA表達(dá)Fig1-1ExpressionofsCLUonmRNAleveldetectedbyReal-timePCR

Real-timePCR檢測(cè)sCLUmRNA的表達(dá)水平

Western-blot檢測(cè)sCLU蛋白表達(dá)Fig1-3WesternblottinganalysisshowstheexpressionofsCLUprotein

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]RNAi沉默clusterin基因?qū)β殉舶㏒KOV3細(xì)胞放射敏感性的影響[J]. 黃鑼,張幸平,陳誠(chéng),羅茜,吳永忠.  重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2011(11)
[2]Clusterin基因沉默對(duì)卵巢癌SKOV3細(xì)胞增殖與侵襲的影響[J]. 黃鑼,羅茜,陳誠(chéng),張幸平,吳永忠.  第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2011(01)
[3]聚集素在前列腺癌細(xì)胞不同周期時(shí)相的表達(dá)[J]. 李學(xué)松,周利群,何志嵩,辛殿琪,那彥群,梁云燕,王代樹(shù),郭應(yīng)祿.  中華泌尿外科雜志. 2006(01)



本文編號(hào)：3464193