目的:研究mir-148a通過靶向調控重組人動力蛋白輕鏈LC8 type 2（Recombinant Human Dynein Light Chain LC8 Type-2,DYNLL2）對神經膠質瘤（GBM）細胞遷移和侵襲能力的影響。方法:1、運用生物信息學方法篩選預測mir-148a可能的靶基因。用常用的miRNA靶基因專業(yè)的預測軟件如microrna.org、TargetScan、miRBase篩選出mir-148a的潛在靶基因,將三種軟件預測結果重復率高的基因作為候選基因。2、用qRT-PCR和Western Blot方法檢測DYNLL2在神經膠質細胞與膠質瘤細胞中的表達水平,觀察mir-148a是否影響DYNLL2的表達。比較DYNLL2基因在正常神經膠質細胞與膠質瘤細胞中的表達差異性;同時,在神經膠質瘤細胞中,觀察mir-148a過表達與抑制表達是否影響mir-148a的表達水平。3、運用雙熒光素報告酶基因實驗驗證DYNLL2是否為mir-148a靶基因。制備含有待檢測基因-Luc/Rluc的重組質粒,將帶有Luc/Rluc標記的報告基因和目的基因進行共轉染,采用雙熒光素酶... 

【文章來源】：湖南師范大學湖南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

DYNLL2在神經膠質瘤細胞系miR-148a過表達組與對照組中的表達與對照pre-miRNA轉染細胞比較;場<0.05,

３．２．２?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ檢測ＤＹＮＬＬ２的蛋白表達水平結果??分別在正常的神經膠質細胞以及膠質瘤細胞進行Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ實驗，根據(jù)實??驗結果可知，ＤＹＮＬＬ２的蛋白水平在正常膠質細胞中的表達量高于膠質瘤細胞系??中的表達。各膠質瘤細胞組與正常膠質細胞組之間的表達差異具有統(tǒng)計學意義（Ｐ??＜０．０５），見圖５。為了進一步驗證ＤＹＮＬＬ２是ｍｉｒ－１４８ａ的一個真實祀基因，我們??在ｍｉｒ－１４８ａ過表達的神經膠質瘤細胞與抑制表達的祌經膠質瘤細胞中分別進行??Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ實驗檢測ＤＹＮＬＬ２在蛋白質翻譯水平的驗證，由實驗結果得知，在??神經膠質瘤細胞中過表達ｍｉｒ－１４８ａ之后，ＤＹＮＬＬ２的蛋白表達量相對于對照組要??低，而在神經膠質瘤細胞中抑制表達ｍｉｒ－１４８ａ后，ＤＹＮＬＬ２的蛋白表達量要高于??對照組，這種表達差異具有統(tǒng)計學意義（ＰＣ０．０５），見圖６、圖７。??４?－??

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本文編號：3422648