發(fā)布時(shí)間：2021-10-05 13:27

　　在生物體中,周期節(jié)律作為神經(jīng)、體液和免疫調(diào)節(jié)系統(tǒng)以外的另一個(gè)調(diào)節(jié)系統(tǒng)在機(jī)體正常功能的維持中起著非常重要的功能。周期節(jié)律的破壞會(huì)導(dǎo)致機(jī)體患病的幾率增加,包括癌癥的發(fā)生。正常的周期節(jié)律受到一組核心鐘基因通過轉(zhuǎn)錄-翻譯負(fù)反饋環(huán)路精細(xì)調(diào)控。已有研究指出,在哺乳動(dòng)物中,約10%的基因受到鐘基因的調(diào)控,正因?yàn)殓娀驅(qū)Χ嗷虻恼{(diào)控,它可以參與到不同的細(xì)胞信號(hào)通路當(dāng)中,在腫瘤中可以作為癌基因或抑癌基因發(fā)揮功能。MiRNAs是能在轉(zhuǎn)錄后調(diào)控基因表達(dá)的小非編碼RNA,它可以通過結(jié)合到靶基因的3’UTR抑制基因的翻譯或?qū)е耺RNA的降解,從而抑制靶基因的表達(dá)。MiRNA的改變?cè)诎ㄉ窠?jīng)膠質(zhì)瘤在內(nèi)的腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要功能。Xia et al.發(fā)現(xiàn)miR-124在膠質(zhì)瘤中表達(dá)降低并證明了miR-124在細(xì)胞中通過作用于特定的靶基因如SNAl2抑制膠質(zhì)瘤的增殖、遷移和成瘤。雖然鐘基因和miRNAs在腫瘤中的功能都已有相當(dāng)多的研究,但是關(guān)于鐘基因和niRNAs的相互作用對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤的影響還知之甚少。為了研究核心鐘基因CLOCK在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的分子機(jī)理,我們首先檢測(cè)了16例不同級(jí)別的膠質(zhì)瘤組織和兩例正常腦組織... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：100 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
實(shí)驗(yàn)材料
    1. 主要化學(xué)試劑及實(shí)驗(yàn)材料
    2. 主要儀器
    3. 工具酶、相對(duì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及試劑盒
    4. 抗體
    5. 質(zhì)粒構(gòu)建載體
    6. DNA引物和合成的小RNA
    7. 菌株
    8. 細(xì)胞株
    9. 細(xì)胞培養(yǎng)基
    10. 人正常腦組織和神經(jīng)膠質(zhì)瘤樣本
    11. 軟件及網(wǎng)絡(luò)資源
實(shí)驗(yàn)方法
    1. 組織及細(xì)胞總蛋白的提取
    2. 蛋白質(zhì)濃度測(cè)定
        2.1 實(shí)驗(yàn)原理
        2.2 試劑
        2.3 實(shí)驗(yàn)步驟
    3. Western blotting蛋白印記實(shí)驗(yàn)
        3.1 Western-blotting雜交用液
        3.2 Western-Blotting蛋白印跡雜交
    4. 細(xì)胞總RNA的提取
    5. 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        5.1 原理
        5.2 模板的制備
        5.3 實(shí)時(shí)定量PCR
    6. 克隆構(gòu)建
        6.1 PCR反應(yīng)
        6.2 PCR反應(yīng)程序
        6.3 限制性內(nèi)切酶酶切反應(yīng)
        6.4 酶切產(chǎn)物回收
        6.5 連接
        6.6 轉(zhuǎn)化
        6.7 接菌
        6.8 質(zhì)粒抽提
        6.9 酶切鑒定
        6.10 測(cè)序及結(jié)果分析
    7. 細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染
        7.1 細(xì)胞培養(yǎng)及傳代
        7.2 轉(zhuǎn)染
    8. MTT
        8.1 原理
        8.2 MTT溶液的配制
        8.3 操作步驟
    9. 克隆形成實(shí)驗(yàn)
    10. TRANSWELL細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
        10.1 實(shí)驗(yàn)原理
        10.2 實(shí)驗(yàn)步驟
    11. 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)
        11.1 實(shí)驗(yàn)原理
        11.2 實(shí)驗(yàn)步驟
    12. 熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)
        12.1 原理
        12.2 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備
        12.3 熒光素酶基因活性檢測(cè)
    13. 數(shù)據(jù)處理和分析
結(jié)果
    1. 膠質(zhì)瘤組織和膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中CLOCK蛋白表達(dá)檢測(cè)
    2. CLOCK對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)的影響
    3. CLOCK對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移的影響
    4. miR-124在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中對(duì)CLOCK的靶向作用檢測(cè)
    5. MiR-124和CLOCK膠質(zhì)瘤細(xì)胞中NF-κB的活性的影響
討論
    1. CLOCK蛋白在膠質(zhì)瘤中高表達(dá)提示CLOCK可能在膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮功能
    2. 生物鐘基因CLOCK在膠質(zhì)瘤中發(fā)揮促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和遷移作用
    3. 膠質(zhì)瘤中miR-124的低表達(dá)是CLOCK高表達(dá)的原因
    4. CLOCK對(duì)NF-κB活性的影響
    5. miR-124-CLOCK-NF-κB在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的關(guān)系
小結(jié)
不足與展望
參考文獻(xiàn)
論文綜述
    參考文獻(xiàn)
附錄
個(gè)人簡(jiǎn)歷
論文和會(huì)議摘要
致謝



本文編號(hào)：3419833