目的：膠質(zhì)瘤是最常見的腦內(nèi)原發(fā)性的腫瘤,其發(fā)病率在所有顱內(nèi)腫瘤中居第一位。其中,IV型膠質(zhì)瘤的惡性程度最強(qiáng)。盡管目前臨床上普遍開展了手術(shù)、放療、化療等多種治療方法,但膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后仍然較差,其5年生存率大約10%。由于IV型膠質(zhì)瘤的侵襲性很強(qiáng),對現(xiàn)有化療藥物普遍存在耐藥性,所以迫切需要更多的研究來優(yōu)化治療手段。探索膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展的新治療靶點,可能為提高膠質(zhì)瘤的臨床治療效果帶來希望。有研究表明,RAS/RAF信號通路在膠質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展中起到重要的作用。其中,Raf-1激酶抑制蛋白（Raf-1kinase inhibitor protein,RKIP）屬于磷脂酰乙醇胺家族的一員,參與調(diào)控惡性腫瘤。有研究發(fā)現(xiàn),RKIP能通過抑制Raf-1-MEK1/2-ERK1/2和NF-κB信號通路的活性,從而抵消這兩條信號通路促生存、抗凋亡的作用,最終抑制腫瘤細(xì)胞的生長。過表達(dá)RKIP可以增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對化療藥物的敏感性。然而,RKIP在膠質(zhì)瘤中的作用及相關(guān)機(jī)制,目前尚不清楚。MicroRNA是一類長度大約為19-25個核糖核酸的小分子RNA,自從1998年在線蟲上首次發(fā)現(xiàn)后,其表達(dá)和功能逐漸被廣為... 

【文章來源】：中南大學(xué)湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：博士

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一正常人膠質(zhì)細(xì)胞和膠質(zhì)瘤細(xì)胞中RKIPmRNA的表達(dá)

博士學(xué)位論文 2 RKIP在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及作用2.4.2膠質(zhì)瘤細(xì)胞中RKIP的表達(dá)選取正常人膠質(zhì)細(xì)胞HEB細(xì)胞作為control，SHG44, U251, U87三株膠質(zhì)瘤細(xì)胞作為實驗組，如圖2-2，2-3所示，RKIP相較于control組，在各膠質(zhì)瘤細(xì)胞株中表達(dá)明顯降低，P值在SHG44, U251, U87三株膠質(zhì)瘤細(xì)胞與control組比較中分別為0.0204，0.0048，0.0083，具有統(tǒng)計學(xué)意義；Western blot結(jié)果顯示RKIP在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的表達(dá)水平也明顯低于正常膠質(zhì)細(xì)胞，尤其在U251，U87細(xì)胞中差異最為明顯。因此，接下來實驗細(xì)胞株選用U251，U87。此處Real-time PCR實驗均以P-actin為內(nèi)參，得到的溶解曲線為單峰，即表示所獲得PCR產(chǎn)物為特異性產(chǎn)物。 P=0.0083

圖2-7 U251細(xì)胞中過表達(dá)RKIP對細(xì)胞增殖能力的影響2.4.5過表達(dá)RKIP對U87，IJ251細(xì)胞侵襲能力的影響在膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87，U251細(xì)胞中分別加入空白慢病毒對照和RKIP過表達(dá)慢病毒，得到三組實驗組，Control，Vector轉(zhuǎn)染組，RKIP轉(zhuǎn)染組。將Transwell小室放入培養(yǎng)板中，小室內(nèi)稱上室，培養(yǎng)板內(nèi)稱下室，上室的上層培養(yǎng)液分別加入80%匯合度的以上3組處理細(xì)胞。下室內(nèi)盛裝下層培養(yǎng)液，即完全培養(yǎng)液，上下層培養(yǎng)液（無血清培養(yǎng)液）以聚碳酸酯膜相隔。我們將膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87，U251種在上室內(nèi)，由于聚碳酸酷膜有通透性，下層培養(yǎng)液中趨化因子胎牛血清可以影響到上室內(nèi)的細(xì)胞，誘導(dǎo)其加速其侵襲轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)板內(nèi)，即下室。24h后，將聚碳酸酷膜下層面進(jìn)行Gimsa染色，拍照，得到如圖2-8，2-9結(jié)果。結(jié)果顯示，相比于空白對照組和空白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組，RKIP轉(zhuǎn)染組的藍(lán)紫色染色細(xì)胞顯著減少，提示RKIP過表達(dá)可抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87，U251的侵襲轉(zhuǎn)移能力。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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