目的:探討miR-34b/miR-23a靶向Keap1/ULK1調控大鼠腦缺血再灌注氧化應激反應的分子機制。方法:（1）應用QPCR技術檢測I/R大鼠腦梗死核心組織中miR-34b/miR-23a的表達水平;通過慢病毒技術在MCAO大鼠腦組織中過表達miR-34b/miR-23a,再灌注后Berdron評分與TTC染色檢測大鼠的神經(jīng)損傷和腦梗死體積,化學比色法測定總SOD、NO和MnSOD含量,ELISA檢測3-NT含量;（2）借助QPCR和Western blot技術檢測I/R大鼠腦梗死核心組織中Keap1/ULK1的表達情況,檢測miR-34b/miR-23a對Keap1/ULK1的表達調控,并用雙熒光素酶實驗驗證miR-34b/miR-23a與Keap1-3′-UTR/ULK1-3′-UTR的靶向結合位點;（3）采用H₂O₂誘導細胞氧化損傷,分別上下調Keap1,過表達miR-34b和Keap1,過表達miR-23a和ULK1,再用化學比色法測定總SOD、NO與MnSOD的含量,ELISA檢測3-NT的含量。結果:（1）相較于假手術組,... 

【文章來源】：新疆醫(yī)科大學新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：130 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

腦缺血再灌注對腦組織中miR-34b-3p的表達影響

0.934 0.996 0.198 0.667 1.5241.082 0.938 0.260 0.732 1.458圖1-2 腦缺血再灌注對腦組織中miR-23a-5p的表達影響control：對照組；sham：假手術組；1：再灌注1h；4：再灌注4h；24：再灌注24h。Fig.1-2 Relative expression of miR-23a-5p in I/Rcontrol，sham，1：I/R 1h，4：I/R 4h，24：I/R 24h.2.2 miR-34b和miR-23a的慢病毒過表達驗證為了研究miR-34b-3p和miR-23a-5p在I/R損傷中的詳細功能，我們通過在腦室內分別注射miR-34b-3p和miR-23a-5p過表達慢病毒來實現(xiàn)大鼠組織中的miR-34b-3p和miR-23a-5p的過表達，并通過實時熒光定量PCR進行效果驗證。如圖1-3為注射miR-34b-3p過表達慢病毒后大鼠組織中miR-34b-3p表達效率檢測，結果顯示注射miR-34b-3p過表達慢病毒后大鼠組織中miR-34b-3p的表達水平顯著高于對照組（P＜0.01）。如圖1-4為注射miR-23a-5p過表達慢病毒后大鼠組織中miR-23a-5p表達效率檢測

新疆醫(yī)科大學博士學位論文36圖1-3 大鼠腦組織中miR-34b-3p過表達慢病毒效率驗證結果Fig.1-3 Validation of the efficiency of miR-34b-3p over-expression lentivirus in rat brain表1-17 大鼠腦組織中miR-23a-3p過表達慢病毒效率Tab 1-17 Validation of the efficiency of miR-23a-3p over-expression lentivirus in rat brainpLVX-NC pLVX-miR-23a1.000 2.2011.050 2.3871.064 2.081圖1-4 大鼠腦組織中miR-23a-5p過表達慢病毒效率驗證結果Fig.1-4 Validation of the efficiency of miR-23a-5p over-expression lentivirus in rat brain2.3 miR-34b/miR-23a過表達對I/R神經(jīng)功能評分的影響過表達慢病毒注射后3天，建立MCAO大鼠模型。MCAO大鼠建模蘇醒后的大鼠可能會出現(xiàn)一些神經(jīng)功能損傷的癥狀。有些大鼠會出現(xiàn)精神差，嗜睡，反應慢，進

【參考文獻】：
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