神經(jīng)膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的原發(fā)性惡性腫瘤,如何進一步了解腫瘤發(fā)病的機理,為治療腦膠質(zhì)瘤探索新的思路和方法,以改善腦膠質(zhì)瘤患者的生存率及生存質(zhì)量,這一直是醫(yī)學面臨的難題。表觀遺傳學指研究不引起基因序列改變,但可以影響基因表達的可遺傳性改變,其中DNA甲基化是人類最為常見的表觀遺傳改變,膠質(zhì)瘤中也存在不同形式的異常甲基化,包括全基因組低甲基化,啟動子CpG島高甲基化,這些改變可能導致癌基因的活化和/或抑癌基因的表達沉默而最終形成腫瘤。本課題旨在研究與神經(jīng)膠質(zhì)瘤相關(guān)的部分腫瘤基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)與腫瘤患者臨床預后的相關(guān)性以及對甲基化狀態(tài)檢測方法的探究,以期找到一種適合于臨床應用的檢測方法,對腦膠質(zhì)瘤早期診斷、復發(fā)監(jiān)測、預后評判、個體化治療方案的選擇以及進一步行分子生物學治療提供理論依據(jù)。第一部分人腦膠質(zhì)瘤MGMT啟動子甲基化檢測方法的研究實驗目的巢式MSP是目前研究MGMT啟動子甲基化的方法中比較成熟的種,并已用巢式MSP法建立了MGMT啟動子甲基化狀態(tài)的預測價值。本實驗中,我們用一種靈敏且高通量的實時熒光定量的方法（MethyLight）來檢測膠質(zhì)瘤MGMT啟動子甲基化狀態(tài),對比分... 

【文章來源】：復旦大學上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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ACTB和MGMT標準曲線及有效性分析

^ .丨“ ,“ j ~actb“ 1 <~ MGMTJ I 1 i 3 4 S S 7 ILeg CORe<dy OMOKIMM圖3 ： ACTB和MGMT標準曲線及有效性分析如圖4A所示，巢式MSP檢測方法中，電泳結(jié)果中出現(xiàn)未甲基化條帶（U)，而沒有出現(xiàn)甲基化條帶（M),則判定該樣本未發(fā)生甲基化；電泳結(jié)果中出現(xiàn)M條帶或者M和U條帶均出現(xiàn)，則判斷該樣本發(fā)生甲基化。如圖4B所示，實時定量MethyLight檢測方法中，有擴增曲線，引物經(jīng)過驗證未出現(xiàn)二聚體，且經(jīng)SDS1.2分析軟件得到的Ct值低于40的，我們認為該實驗數(shù)據(jù)有效，然后進行分析判定對應的樣本是否發(fā)生甲基化。

圖2 WKaplan-Meier曲線表示CD133啟動子甲基化狀態(tài)與患者PFS和OS之間的相關(guān)性。A：用原始的CD133啟動+甲基化狀態(tài)分類法得到的Kaplan-Meier曲線；B：用調(diào)整后的CD133啟動子甲基化狀態(tài)分類法得到的Ka plan-Meier曲線。多變量分析證實，CD133未甲基化是獨立于WHO分級，年齡和手術(shù)切除范圍因素之外導致患者OS較短的預后因素（HR, 2.87； 95%可信區(qū)間為1.74-4.73;P <0.001)；對于PFS較短的患者來說，同樣也存在CD133未甲基化（HR，2.61；95%可信區(qū)間為 1.57-4.34; P <0.001)(見表2)。表2:多因素分析顯示CD133啟動子甲基化狀態(tài)、年齡、手術(shù)切除范圍勾患者PFS及OS的相 ^ PFS (n=152) OS (n=170)變量 HR (95% CI) P HR (95% CI) PCD133 M+, U-/1 1 1甲基化 M+, U+ 1.11 (0.58-2.11) 0.751 1.58 (0.86-2.88) 0.140


本文編號：3296062