據(jù)統(tǒng)計(jì),腦膠質(zhì)瘤約占腦部腫瘤的30～40%,而傳統(tǒng)的手術(shù)治療、放療或化療并不能取得理想的治療效果,因此,探尋新的治療方法成為腦膠質(zhì)瘤的研究重點(diǎn)。細(xì)胞凋亡在胚胎發(fā)育與組織分化中起著關(guān)鍵作用,細(xì)胞凋亡失調(diào)對(duì)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展甚為重要,其存在細(xì)胞內(nèi)與細(xì)胞外兩條途徑。化療藥物鹽酸阿霉素（Doxorubicin, DOX）通過細(xì)胞內(nèi)途徑促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡；而腫瘤壞死因子家族成員TRAIL （TNF-related apoptosis-inducing ligand）主要通過細(xì)胞外途徑促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡。本課題以DOX與TRAIL為治療藥物,采用長循環(huán)脂質(zhì)體作為藥物載體,制備復(fù)方脂質(zhì)體（TRAIL-LP/DOX-LP）,以期同時(shí)通過細(xì)胞內(nèi)途徑與細(xì)胞外途徑,發(fā)揮兩種藥物的協(xié)同抗腫瘤作用,延長藥物的體內(nèi)滯留時(shí)間,并利用腫瘤的EPR效應(yīng)增加藥物在腫瘤部位的蓄積,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡,增強(qiáng)抗腫瘤效果。本文第一章為復(fù)方TRAIL/DOX溶液劑的協(xié)同抗腫瘤作用研究。以對(duì)TRAIL不敏感的人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87為研究對(duì)象,考察了TRAIL與DOX合用的協(xié)同增效作用,并對(duì)其體內(nèi)抗U87腦膠質(zhì)瘤的藥效學(xué)進(jìn)行了初步探索。結(jié)果表... 

【文章來源】：復(fù)旦大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：103 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
前言
第一章 TRAIL與阿霉素的協(xié)同抗腫瘤作用研究
    第一節(jié) TRAIL與阿霉素合用增強(qiáng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用
        1 儀器和材料
            1.1 儀器
            1.2 材料和試劑
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2 細(xì)胞毒研究
            2.3 細(xì)胞凋亡檢測(cè)
            2.4 細(xì)胞周期檢測(cè)
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 單用TRAIL對(duì)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒作用
            3.2 TRAIL與阿霉素合用對(duì)U87細(xì)胞的殺傷作用
                3.2.1 細(xì)胞毒作用
                3.2.2 治療指數(shù)(therapeutic index,TI)的評(píng)價(jià)
            3.3 TRAIL與阿霉素合用對(duì)A-549細(xì)胞的殺傷作用
                3.3.1 細(xì)胞毒作用
                3.3.2 細(xì)胞凋亡檢測(cè)
                3.3.3 細(xì)胞周期檢測(cè)
    第二節(jié) TRAIL與阿霉素合用的體內(nèi)藥效學(xué)評(píng)價(jià)
        1 儀器和材料
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 TRAIL與阿霉素合用對(duì)原位腦膠質(zhì)瘤模型的療效評(píng)價(jià)
                2.1.1 U87原位腦膠質(zhì)瘤模型建立方法的研究
                2.1.2 模型的驗(yàn)證
                2.1.3 實(shí)驗(yàn)分組及治療方案
            2.2 TRAIL與阿霉素合用對(duì)肺癌皮下瘤模型的療效評(píng)價(jià)
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 原位腦膠質(zhì)瘤模型的藥效學(xué)評(píng)價(jià)
                3.1.1 原位腦膠質(zhì)瘤模型的驗(yàn)證
                3.1.2 原位腦膠質(zhì)瘤模型的藥學(xué)評(píng)價(jià)
            3.2 肺癌皮下瘤模型的藥效學(xué)評(píng)價(jià)
        4 討論
            4.1 腫瘤細(xì)胞對(duì)TRAIL的耐藥機(jī)制
            4.2 關(guān)于腦膠質(zhì)瘤模型的建立
            4.3 阿霉素溶液劑對(duì)肺癌皮下瘤的體內(nèi)藥效
            4.4 TRAIL與化療藥物合用治療腫瘤的研究進(jìn)展
    本章小結(jié)
第二章 TRAIL-LP/DOX-LP的制備及其腦膠質(zhì)瘤的被動(dòng)靶向特性考察
    第一節(jié) TRAIL-LP/DOX-LP的制備與表征
        1 儀器和材料
            1.1 儀器
            1.2 材料和試劑
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 溶液的配制
            2.2 DOX-LP的制備
            2.3 DOX-LP的包封率與釋放度測(cè)定
                2.3.1 DOX-LP的包封率測(cè)定
                2.3.2 DOX-LP的釋放度測(cè)定
            2.4 TRAIL-LP的制備
            2.5 TRAIL-LP的包封率與釋放度測(cè)定
                2.5.1 洗脫曲線的制備
                2.5.2 TRAIL-LP的包封率測(cè)定
                2.5.3 TRAIL-LP的釋放度測(cè)定
            2.6 DOX-LP與TRAIL-LP的粒徑、Zeta電位的測(cè)定
            2.7 DOX-LP與TRAIL-LP的穩(wěn)定性考察
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 脂質(zhì)體的表征
                3.1.1 脂質(zhì)體的包封率、粒徑等考察
                3.1.2 透射電鏡鑒定
            3.2 脂質(zhì)體的釋放度
            3.3 脂質(zhì)體的穩(wěn)定性
    第二節(jié) 脂質(zhì)體的腦膠質(zhì)瘤被動(dòng)靶向特性考察
        1 儀器和材料
            1.1 儀器
            1.2 材料和試劑
            1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 溶液的配制
            2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.3 荷原位腦膠質(zhì)瘤動(dòng)物模型的構(gòu)建
            2.4 DiR-LP的制備
            2.5 脂質(zhì)體的腦膠質(zhì)瘤靶向特性考察
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4 討論
            4.1 復(fù)方脂質(zhì)體的制備方法
            4.2 脂質(zhì)體粒徑大小的控制
            4.3 延長TRAIL體內(nèi)滯留時(shí)間的方法
            4.4 小動(dòng)物活體成像技術(shù)
            4.5 脂質(zhì)體在肝腎的蓄積
    本章小結(jié)
第三章 TRAIL-LP/DOX-LP治療U87腦膠質(zhì)瘤的藥效學(xué)及安全性評(píng)價(jià)
    第一節(jié) TRAIL-LP/DOX-LP治療U87腦膠質(zhì)瘤的體內(nèi)外藥效學(xué)研究
        1 儀器和材料
            1.1 儀器
            1.2 材料和試劑
            1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 TRAIL-LP/DOX-LP的體外細(xì)胞殺傷作用研究
            2.2 TRAIL-LP/DOX-LP的體內(nèi)藥效學(xué)評(píng)價(jià)
                2.2.1 組織水平的病理解剖學(xué)評(píng)價(jià)
                2.2.2 流式細(xì)胞儀PI染色檢測(cè)凋亡率
                2.2.3 荷瘤鼠生存期評(píng)價(jià)
                2.2.4 Actived caspase-3表達(dá)量的檢測(cè)
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 TRAIL-LP/DOX-LP對(duì)體外U87細(xì)胞的凋亡作用及抑制率
            3.2 體內(nèi)藥效學(xué)評(píng)價(jià)
                3.2.1 組織水平的病理解剖學(xué)評(píng)價(jià)
                3.2.2 流式細(xì)胞儀PI染色檢測(cè)凋亡率
                3.2.3 荷瘤鼠的生存期評(píng)價(jià)
                3.2.4 蛋白水平免疫熒光檢測(cè)actived caspase-3的表達(dá)
    第二節(jié) TRAIL-LP/DOX-LP治療U87腦膠質(zhì)瘤的體內(nèi)外安全性評(píng)價(jià)
        1 儀器和材料
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 TRAIL-LP/DOX-LP對(duì)正常細(xì)胞的抑制率及細(xì)胞凋亡考察
            2.2 TRAIL-LP/DOX-LP的體內(nèi)安全性評(píng)價(jià)
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 TRAIL-LP/DOX-LP對(duì)正常細(xì)胞的細(xì)胞毒作用評(píng)價(jià)
            3.2 TRAIL-LP/DOX-LP體內(nèi)安全性的初步評(píng)價(jià)
        4 討論
            4.1 關(guān)于腫瘤大小的評(píng)價(jià)
            4.2 TRAIL-LP/DOX-LP治療腦膠質(zhì)瘤的體內(nèi)藥效學(xué)評(píng)價(jià)
            4.3 TRAIL對(duì)正常組織的毒性
    本章小結(jié)
第四章 TRAIL-LP/DOX-LP協(xié)同抗腦膠質(zhì)瘤的機(jī)理研究
    第一節(jié) TRAIL-LP/DOX-LP協(xié)同抗腦膠質(zhì)瘤機(jī)理的體外研究
        1 儀器和材料
            1.1 儀器
            1.2 材料和試劑
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 U87細(xì)胞的培養(yǎng)
            2.2 U87細(xì)胞內(nèi)死亡受體表達(dá)的測(cè)定
            2.3 U87細(xì)胞內(nèi)caspase家族及Bcl-2家族表達(dá)的測(cè)定
            2.4 U87細(xì)胞表面DR4和DR5表達(dá)的測(cè)定
            2.5 受體阻斷對(duì)TRAIL-LP/DOX-LP誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的影響測(cè)定
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 DOX-LP對(duì)U87細(xì)胞內(nèi)死亡受體表達(dá)的影響
            3.2 DOX-LP對(duì)U87細(xì)胞表面死亡受體表達(dá)的影響
            3.3 U87細(xì)胞死亡受體阻斷實(shí)驗(yàn)
            3.4 TRAIL-LP/DOX-LP對(duì)U87細(xì)胞內(nèi)caspase表達(dá)的影響
            3.5 TRAIL-LP/DOX-LP對(duì)U87細(xì)胞內(nèi)Bcl家族蛋白表達(dá)的影響
    第二節(jié) TRAIL-LP/DOX-LP協(xié)同抗腦膠質(zhì)瘤機(jī)理的體內(nèi)研究
        1 儀器和材料
            1.1 儀器
            1.2 材料和試劑
            1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 U87原位腦膠質(zhì)瘤模型的建立
            2.2 實(shí)驗(yàn)分組與治療方案
            2.3 蛋白水平免疫熒光檢測(cè)DR4與DR5的表達(dá)量
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 荷瘤鼠給藥后體內(nèi)DR5的表達(dá)
            3.2 荷瘤鼠給藥后體內(nèi)DR4的表達(dá)
        4 討論
            4.1 DR4與DR5在TRAIL誘導(dǎo)的凋亡中的作用
            4.2 關(guān)于體外機(jī)理研究的細(xì)胞模型選取
    本章小結(jié)
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
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致謝
在校期間發(fā)表論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3289234