發(fā)布時(shí)間：2021-06-29 15:54

　　目的：缺血性腦損傷是主要的致死、致殘性疾病，為患者家庭和社會(huì)帶來沉重的負(fù)擔(dān)，但至今尚無有效的治療策略來改善其預(yù)后。短暫的、亞致死性缺血預(yù)處理能使細(xì)胞和組織對(duì)隨后發(fā)生的長(zhǎng)時(shí)間的致死性腦缺血損傷起到保護(hù)作用，這一現(xiàn)象被稱為缺血耐受。磷脂�；�3-激酶PI3K/Akt信號(hào)通路在缺血預(yù)處理過程中發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。Cbl-b屬于Cbl原癌基因家族成員之一。在T細(xì)胞中Cbl-b通過泛素化PI3K的P85亞基，負(fù)調(diào)控PI3K/Akt信號(hào)通路，抑制T細(xì)胞的活化。Cbl-b對(duì)PI3K/Akt通路的負(fù)調(diào)控作用在T細(xì)胞、骨瘤細(xì)胞、B細(xì)胞、肥大細(xì)胞等多種細(xì)胞中都有發(fā)現(xiàn)。我們研究組先前的研究表明，在大鼠局灶性腦缺血模型中缺血耐受通過抑制Cbl-b、增加磷酸化Akt的表達(dá)來抑制細(xì)胞凋亡，從而起到神經(jīng)保護(hù)作用。在T細(xì)胞內(nèi)鈣水平升高并與鈣調(diào)素結(jié)合，從而使鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶（Calcineurin，CaN）活化，活化的CaN使轉(zhuǎn)錄因子NFAT脫磷酸化并轉(zhuǎn)移至核內(nèi)，NFAT作為一種轉(zhuǎn)錄因子調(diào)節(jié)Cbl-b基因的表達(dá)。本研究利用PC12細(xì)胞系建立氧糖剝奪缺血耐受模型，觀察Ca²⁺/CaN/Cbl-b與PI3... 

【文章來源】：大連醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一部分 泛素連接酶 Cbl-b 參與缺血預(yù)處理對(duì) PI3K/Akt 通路的調(diào)控
    前言
    材料與方法
        1. 材料
            1.1 細(xì)胞株
            1.2 試劑
            1.3 儀器
        2. 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 PC12 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2 氧糖剝奪
            2.3 氧糖剝奪預(yù)處理
            2.4 MTT 檢測(cè)細(xì)胞存活率
            2.5 Hoechst 33258 細(xì)胞核染色檢測(cè)凋亡細(xì)胞
            2.6 Real time PCR
            2.7 蛋白質(zhì)免疫印跡（Western blot）
            2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    結(jié)果
        1. 預(yù)處理防止 OGD 誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡
        2. Cbl-b 參與 OGD 預(yù)處理過程
        3. Cbl-b 對(duì) OGD 預(yù)處理的反應(yīng)大于 Akt 的激活
        4. OGD 預(yù)處理過程中 Akt 活性調(diào)節(jié) GSK3β磷酸化
        5. Akt 活性在 OGD 預(yù)處理過程中調(diào)控細(xì)胞的凋亡
    討論
    結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
第二部分 Ca~(2+)/CaN 參與缺血預(yù)處理對(duì) Cbl-b 的調(diào)控
    前言
    材料與方法
        1. 材料
            1.1 細(xì)胞株
            1.2 試劑
        2. 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 PC12 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2 氧糖剝奪
            2.3 氧糖剝奪預(yù)處理
            2.4 MTT 檢測(cè)細(xì)胞存活率
            2.5 蛋白質(zhì)免疫印跡（Western Blot）
    結(jié)果
        1. OGD 缺血預(yù)處理降低缺血導(dǎo)致 CaN 表達(dá)的增加
        2. 不同時(shí)間點(diǎn) CaN 與 Cbl-b 的對(duì)應(yīng)表達(dá)
        3. A23187 對(duì)預(yù)處理組 CaN 和 Cbl-b 表達(dá)的影響
        4. 鈣離子調(diào)控藥物在缺血過程中對(duì) CaN 和 Cbl-b 表達(dá)的影響
    討論
    結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
第三部分 Ca~(2+)/CaN/Cbl-b/Akt 在尼莫地平和 MK801 藥物預(yù)處理中的作用研究
    前言
    材料和方法
        1. 材料
            1.1 細(xì)胞株
            1.2 試劑
        2. 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 PC12 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2 氧糖剝奪
            2.3 氧糖剝奪預(yù)處理
            2.4 MTT 檢測(cè)細(xì)胞存活率
            2.5 Hoechst 33258 細(xì)胞核染色檢測(cè)凋亡細(xì)胞
            2.6 蛋白質(zhì)免疫印跡（Western Blot）
    結(jié)果
        1. 尼莫地平或 MK801 預(yù)處理抑制 OGD 誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡
        2. 尼莫地平或 MK801 預(yù)處理對(duì) CaN、Cbl-b、PI3K 及 p-GSK3 β表達(dá)的影響
        3. 尼莫地平或 M K 801 預(yù)處理調(diào)控細(xì)胞的凋亡
    討論
    結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]caspase-3抑制藥和鈣拮抗藥聯(lián)合應(yīng)用對(duì)氧糖剝奪性神經(jīng)元缺血損害的保護(hù)作用[J]. 張擁波,董為偉,王得新.  中國現(xiàn)代神經(jīng)疾病雜志. 2007(01)
[2]大鼠心肌缺血預(yù)適應(yīng)相關(guān)基因5的克隆與特性分析[J]. 王建設(shè),袁燦,王慷慨,王堯玲,劉梅冬,劉可,肖獻(xiàn)忠.  中國動(dòng)脈硬化雜志. 2006(03)
[3]環(huán)孢霉素A對(duì)老齡大鼠慢性腦灌注不足認(rèn)知障礙的效用[J]. 劉之榮,李露斯,卞曉紅,范文輝.  中國神經(jīng)精神疾病雜志. 2001(01)



本文編號(hào)：3256723