本文關(guān)鍵詞：人膠質(zhì)瘤細胞的干細胞特性及誘導分化研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:通過對人膠質(zhì)瘤細胞株U251的干細胞特性和多向分化潛能的相關(guān)研究,揭示膠質(zhì)瘤細胞的細胞生物學特性;進一步研究膠質(zhì)瘤細胞向脂肪細胞及成骨細胞分化的條件及可能的機制;進一步展望誘導分化方法作為一種新穎的腦膠質(zhì)瘤治療方法的臨床應用前景。方法:常規(guī)傳代培養(yǎng)膠質(zhì)瘤細胞株U251,并將U251細胞傳代培養(yǎng)于24孔細胞培養(yǎng)板中,恒溫CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細胞貼壁后,用4%多聚甲醛固定U251細胞,并檢測U251中干細胞標志物Sall4、NCAM、Oct4、Sox2、Nestin、和S100β表達情況,熒光顯微鏡下觀察U251細胞上述標志物的表達情況。將貼壁生長的U251細胞分別經(jīng)成脂肪細胞誘導培養(yǎng)基(含有2μmol/L胰島素、500μmol/L(IBMX)、1μmol/L地塞米松、200μmol/L吲哚美辛)和成骨細胞誘導培養(yǎng)基(含有100mmol/L地塞米松、10mmol/Lβ-甘油磷酸鈉及0.05mmol/L維生素C)誘導分化后,分別用油紅O染色方法檢測細胞中脂滴形成情況,茜素紅染色檢測細胞中鈣結(jié)節(jié)形成情況。CCK8法檢測經(jīng)誘導分化后U251細胞生長曲線。免疫蛋白印跡法分別測定脂肪細胞和成骨特異性蛋白表達以及誘導分化過程中細胞自噬和凋亡蛋白表達情況。結(jié)果:1.多種干細胞標志物均在人膠質(zhì)瘤細胞株U251中穩(wěn)定表達。免疫熒光結(jié)果顯示在U251中神經(jīng)細胞黏附分子NCAM、神經(jīng)嵴干細胞標記物Nestin、神經(jīng)膠質(zhì)細胞標記物S100β,多能干細胞標記物Sall4、Oct4及神經(jīng)干細胞的標記物Sox2均能夠穩(wěn)定表達。2.U251細胞經(jīng)誘導后可以向脂肪細胞分化。在貼壁生長的膠質(zhì)瘤細胞中加入成脂細胞誘導分化培養(yǎng)基后,經(jīng)過誘導不同的時間梯度,油紅O染色發(fā)現(xiàn)膠質(zhì)瘤細胞中出現(xiàn)脂滴,并且隨著誘導的時間越長,脂滴數(shù)量增多并融合增大,且細胞增殖速度減慢,這點由CCK8實驗結(jié)果得以證實。通過免疫蛋白印跡實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)經(jīng)誘導培養(yǎng)基誘導后的膠質(zhì)瘤細胞中脂肪細胞相關(guān)特異性蛋白表達增加。3.U251細胞經(jīng)誘導可以向成骨細胞分化。在貼壁生長的膠質(zhì)瘤細胞中加入成骨細胞誘導分化培養(yǎng)基后,經(jīng)過誘導不同的時間梯度,茜素紅染色發(fā)現(xiàn)膠質(zhì)瘤細胞中出現(xiàn)大量鈣結(jié)節(jié),并且隨著誘導時間的延長,鈣結(jié)節(jié)增多。CCK8實驗結(jié)果顯示經(jīng)誘導分化后腫瘤細胞增殖減慢;免疫蛋白印跡實驗結(jié)果顯示成骨細胞相關(guān)特異性蛋白表達增多,并且隨著誘導時間的延長細胞凋亡、自噬及增殖相關(guān)蛋白表達也增加。結(jié)論:1.人膠質(zhì)瘤細胞U251具有干細胞特性和多向誘導分化潛能,在一定條件能夠被誘導分化為脂肪細胞和成骨細胞。2.誘導分化劑能夠抑制細胞增殖,并能夠促進U251細胞發(fā)生終末分化并出現(xiàn)細胞自噬和凋亡現(xiàn)象。3.誘導分化方法能夠作為人膠質(zhì)瘤是一種潛在的、有效的新型治療方法。
【關(guān)鍵詞】：腦膠質(zhì)瘤 誘導分化 干細胞特性 細胞凋亡 自噬
【學位授予單位】：江蘇大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• 中英文對照表9-13
• 第一章 緒論13-17
• 1.1 膠質(zhì)瘤13
• 1.2 腫瘤干細胞13-14
• 1.3 誘導分化治療14-15
• 1.4 研究的內(nèi)容、方法、目的、意義及技術(shù)路線15-17
• 第二章 人膠質(zhì)瘤細胞的體外培養(yǎng)及干細胞特性鑒定17-23
• 2.1 實驗材料17-19
• 2.1.1 細胞株：人膠質(zhì)瘤U251細胞購于上海細胞庫，，由本實驗室保存于液氮。17
• 2.1.2 主要試劑和試劑盒：17
• 2.1.3 主要實驗設備及耗材：17-18
• 2.1.4 主要試劑的配制18-19
• 2.2 試驗方法19-20
• 2.2.1 細胞培養(yǎng)19-20
• 2.2.2 免疫熒光鑒定膠質(zhì)瘤細胞的干細胞特性20
• 2.3 實驗結(jié)果20-21
• 2.4 討論21-23
• 第三章 體外誘導人膠質(zhì)瘤細胞向脂肪細胞分化23-35
• 3.1 實驗材料23-26
• 3.1.1 細胞株23
• 3.1.2 主要試劑和試劑盒23-24
• 3.1.3 主要實驗設備及器材24
• 3.1.4 主要試劑的配制24-26
• 3.2 試驗方法26-30
• 3.2.1 U251細胞向脂肪細胞誘導分化26
• 3.2.2 油紅O染色26-27
• 3.2.3 免疫蛋白印跡法測定脂肪細胞相關(guān)蛋白表達27-29
• 3.2.4 CCK8法繪制細胞生長曲線測定29-30
• 3.2.5 統(tǒng)計學分析30
• 3.3 實驗結(jié)果30-33
• 3.3.1 油紅O染色結(jié)果30-31
• 3.3.2 免疫印跡結(jié)果及統(tǒng)計分析31-33
• 3.3.3 經(jīng)成脂誘導分化后U251細胞生長曲線33
• 3.4 討論33-35
• 第四章 體外誘導人膠質(zhì)瘤細胞向成骨細胞分化35-42
• 4.1 實驗材料35-36
• 4.1.1 細胞株35
• 4.1.2 主要試劑和試劑盒35-36
• 4.1.3 主要實驗設備和耗材36
• 4.1.4 主要試劑的配制36
• 4.2 試驗方法36-37
• 4.2.1 U251細胞的向成骨細胞誘導分化36
• 4.2.2 茜素紅染色36-37
• 4.2.3 免疫蛋白印跡法檢測成骨細胞相關(guān)特異性蛋白表達37
• 4.2.4 CCK8實驗檢測細胞生長曲線測定37
• 4.2.5 統(tǒng)計學分析37
• 4.3 實驗結(jié)果37-40
• 4.3.1 茜素紅染色結(jié)果37-38
• 4.3.2 免疫印跡結(jié)果及統(tǒng)計分析38-39
• 4.3.3 經(jīng)成骨誘導分化后U251細胞生長曲線39-40
• 4.4 討論40-42
• 實驗總結(jié)及展望42-43
• 1.實驗總結(jié)42
• 2.展望42-43
• 參考文獻43-49
• 綜述49-62
• 參考文獻55-62
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的文章62-63
• 致謝63

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本文編號：325353