目的：研究Shh蛋白對大鼠永久性腦缺血模型的保護作用及其潛在機制。方法：原代大鼠腦微血管內皮細胞1-2代后，應用糖氧剝奪模擬體外缺血模型，分別給予rHu Shh、Cyclopamine預處理，選取2小時、4小時或6小時三個作用時間點為檢測終點，用MTT法或BrdU染色法檢測細胞存活和細胞增殖；建立大鼠永久性腦缺血模型，側腦室注射rHu Shh或PBS，觀察神經(jīng)行為學評分，應用TTC法檢測腦梗塞面積，干濕稱重法檢測腦水腫，依文思藍外滲法檢測血腦屏障通透性，激光散斑襯比技術檢測皮層血流灌注，免疫組織化學法檢測缺血梗塞區(qū)邊緣CD31和α-SMA的陽性表達，用CD31和Ki-67兩種抗體進行免疫熒光雙標，用共聚焦顯微鏡觀察缺血梗塞區(qū)邊緣內皮細胞增殖狀況。應用實時熒光定量PCR的方法檢測Sonic hedgehog（Shh）信號通路中的關鍵成份（Shh，Patched-1，Gli-1）及血管新生因子（VEGF、Ang-1和Ang-2）的mRNA水平，用免疫印跡法（Western blotting）檢測上述因子的蛋白水平。結果：1)rHu Shh可促進OGD處理下原代培養(yǎng)的腦微血管內皮細胞的存活和... 

【文章來源】：華中科技大學湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

與1B原代培養(yǎng)的腦微血管內皮細胞的鑒定：1A:相差顯微鏡下觀察腦微血管內皮細胞；1B：免疫熒光染色示VIII因子表達陽性，DAPI染細

CWesternblotting顯示Shh信號通路分子的Patched-1的蛋白表達水平

AHE染色顯示缺血梗塞區(qū)邊緣（peri-infarctedarea）

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Interaction of L-Arginine-methyl ester and Sonic hedgehog in liver ischemia-reperfusion injury in the rats[J]. Mehmet Cudi Tuncer,Hayrettin Ozturk,Huseyin Buyukbayram,Hulya Ozturk.  World Journal of Gastroenterology. 2007(28)



本文編號：3232790