目的:腦水腫通常指腦內(nèi)含水量的增加,主要是由于血腦屏障的破損（血管源性腦水腫）和外源溶液的流入以及神經(jīng)細胞腫脹（細胞毒性腦水腫）所致。其中,細胞毒性腦水腫來源于大量星形膠質(zhì)細胞的體積膨脹。細胞內(nèi)滲透物質(zhì)濃度增加時,能導致細胞脂質(zhì)雙分子層承受增大的滲透勢能,通過牽拉與細胞膜相連的細胞骨架結(jié)構(gòu),誘導細胞體積的膨脹進而導致神經(jīng)細胞的形態(tài)和結(jié)構(gòu)改變。同時,胞膜的拉伸也能激活機械敏感離子通道,導致離子如Ca2+等流入,通過調(diào)節(jié)動力蛋白分子,導致微絲和微管張力的變化。膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）是星形膠質(zhì)細胞中的主要中間絲蛋白。滲透壓力、微絲和微管張力協(xié)同作用細胞骨架中間絲,誘導細胞結(jié)構(gòu)和形態(tài)變化。本研究課題通過檢測細胞水腫過程中胞內(nèi)微絲、微管結(jié)構(gòu)張力、中間纖維膠質(zhì)纖維酸性蛋白張力和細胞質(zhì)溶液滲透壓的變化,識別調(diào)控神經(jīng)細胞水腫的力學調(diào)控機制,從而揭示細胞毒性腦水腫與神經(jīng)細胞內(nèi)力學活動相關(guān)的分子機制。應用微絲、微管解聚因子上游蛋白Slingshot（SSH）和Protein phosphatasa 2A（PP2A）的中藥單體抑制劑番瀉苷A和斑蝥素以及鈣離子抑制劑聯(lián)合臨床治療藥物來降低細胞內(nèi)張力,治療... 

【文章來源】：南京中醫(yī)藥大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１：?ＧＦＡＰ熒光張力探針的構(gòu)建和流式分選??Ａ：ＧＦＡＰ?探針由?ＰＣＭＶ－ＧＦＡＰ－ｃｐＣｅｒｕｌｅａｎ－７ａａ－ｃｐＶｅｎｕｓ（ｃｐｓｔＦＲＥＴ）－ＧＦＡＰ（ＧｃｐＧ）組成

小顆粒狀蛋白生成。??上述研究表明，我們所設(shè)計的ＡｃｐＡ，?ＴｃｐＴ和ＧｃｐＧ探針對細胞骨架和細胞生理過??程產(chǎn)生影響較小，對細胞幾乎沒有毒性作用（圖１－２）。??Ａ?ＧｃｐＧ?ＡｃｐＡ?Ｃｏｎ?ＴｃｐＴ?＾??ＧＦＰ?蝴８＾?１５０１?＿?ｎｓ?ｎ?ｒｍ?，??ｌ５０ｋｌ）ａ?ＳＴａ?１?ｈｍｒｎｍｍ??丨ｉ丨丨麵丨ｉｍ叫—卜：ｉｉｔｉ??Ｃ?Ａｃｔｉｎ?ＧＦＡＰ?Ｍｅｒｇｅ??Ｔｕｂｕｌｉｎ?ＧＦＡＰ?Ｍｅｒｇｅ??ｊＢＩＨＱ??圖１－２：微絲、微管和膠質(zhì)纖維酸性蛋白熒光張力探針驗證實驗??Ａ：免疫印跡法測定ＭＦ、ＭＴ和ＧＦＡＰ探針的ＧＦＰ和ＧＦＡＰ分子量。Ｂ：四組ＧＦＰ蛋白分子??量相對于ＧＦＡＰ蛋白的半定量分析。Ｃ：轉(zhuǎn)染張力探針后的Ｕ８７細胞，共聚焦激光顯微鏡??觀察對照組和Ｕ８７水腫模型中Ｐ－ａｃｔｉｎ、ａ－ｔｕｂｕｌｉｎ和ａ－ｔｕｂｕｌｉｎ的免疫焚光染色（ｎ?＞５，ｎｓ，??ｐ＞?０．０５，?＊＊ｐ＜?０．０１，?＊＊＊ｐ＜?０．００１，標尺＝２０?（ｉｍ）〇??１２??

??圖１Ｍ：?ＧｃｐＧ張力探針３Ｄ層掃??注：對等滲條件下表達ＧＦＡＰ探針的星形膠質(zhì)細胞使用激光共聚焦ｚ軸層掃，對ＦＲＥＴ信??號進行了光學檢測（第一行）１６位圖像（第二行）（標尺＝２０?ｐｍ）。??４．２?ＧＦＡＰ張力參與細胞形態(tài)改變??星形膠質(zhì)細胞腫脹是細胞毒性腦水腫的一個重要過程，可由細胞間液進入胞內(nèi)引起。??本研究采用ＧＦＡＰ探針來研究Ｕ８７細胞腫脹中的力學作用。??低滲透壓力引起向外的張力導致細胞骨架中間纖維絲產(chǎn)生一定的“拉力”，這與細胞腫??脹、體積增大和細胞骨架結(jié)構(gòu)張力的改變有關(guān)。為了測量ＧＦＡＰ在細胞腫脹過程中的張力??變化，配置不同的低滲溶液３００?ｍＯｓｍ／ｋｇ（等滲ＨＥＰＥＳ緩沖液）２００、１００、５０和０（純水）??ｍＯｓｍ／ｋｇ并將轉(zhuǎn)染探針的Ｕ８７細胞置于不同滲透壓力的溶液中進行ＦＲＥＴ實驗。實驗發(fā)??現(xiàn)：隨著滲透壓的降低，細胞開始膨脹，同時ＧＦＡＰ張力逐漸增大。當滲透壓（ＯＰ）降至??０?ｍＯｓｍ／ｋｇ時，細胞隨著胞漿滲出而解體，ＧＦＡＰ張力迅速下降。以上結(jié)果提示ＧＦＡＰ張??力升高與細胞腫脹和細胞體積增大有關(guān)，隨著細胞體積的增大，ＧＦＡＰ張力也逐漸升高。??因此

【參考文獻】：
期刊論文
[1]腦出血后腦水腫的中醫(yī)藥治療研究進展[J]. 郭明珠,譚文瀾.  大眾科技. 2017(08)
[2]下法對急性腦出血血腫吸收及神經(jīng)功能的影響[J]. 孫韶剛.  中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠程教育. 2013(11)



本文編號：3220418