目的:神經(jīng)母細胞瘤（neuroblastoma,NB）是兒童最常見的顱外實體惡性腫瘤,起源于神經(jīng)嵴,常原發(fā)于腎上腺,其死亡率約占兒童腫瘤死亡率的15%。根據(jù)已明確的預(yù)后因素,包括確診年齡、國際神經(jīng)母細胞瘤分期系統(tǒng)（INSS）、組織病理學(xué)、DNA指數(shù)和MYCN基因擴增情況,將患者分為低危、中危和高危組。高危組患者預(yù)后較差且易復(fù)發(fā),其中腫瘤耐藥是治療過程中存在的最大障礙。因此,尋求新的藥物以提高NB患者治療效果并改善預(yù)后的愿望尤為迫切。Akt是一種絲/蘇氨酸蛋白激酶,在多種腫瘤中發(fā)揮重要作用。在NB腫瘤組織中可以檢測到Akt活性增強,Akt活性增強的NB患者往往預(yù)后較差,表明NB患者的預(yù)后與Akt的活化有著密切聯(lián)系。MK-2206是Akt的特異性抑制劑,我們前期研究發(fā)現(xiàn)MK-2206作為單一藥物不僅具有抑制NB細胞體內(nèi)體外生長的作用,而且能夠提高NB細胞對化療藥物的敏感性。有研究人員發(fā)現(xiàn),MK-2206與mTOR抑制劑RAD001聯(lián)合治療肝癌和膽管癌細胞具有協(xié)同作用。我們前期研究發(fā)現(xiàn),MK-2206和mTOR抑制劑rapamycin聯(lián)合應(yīng)用時在某些NB細胞中產(chǎn)生明顯的協(xié)同作用,這些NB細胞... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 MK-2206和rapamycin聯(lián)合應(yīng)用通過自噬和程序性壞死誘導(dǎo)神經(jīng)母細胞瘤細胞死亡
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 細胞系
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器
        2.2 實驗方法
            2.2.1 細胞培養(yǎng)
            2.2.2 CCK-8細胞增殖檢測
            2.2.3 IncuCyte Zoom變焦活細胞成像
            2.2.4 YOYO-1染色
            2.2.5 透射電子顯微鏡觀察細胞超微結(jié)構(gòu)
            2.2.6 Western Blot
            2.2.7 NB荷瘤裸鼠模型建立、處理及取材
            2.2.8 HE染色
            2.2.9 免疫組織化學(xué)染色
            2.2.10 統(tǒng)計分析
    3 結(jié)果
        3.1 MK-2206和rapamycin聯(lián)合應(yīng)用治療NB細胞具有協(xié)同作用并且不依賴于caspase
        3.2 基因芯片檢測
        3.3 細胞自噬介導(dǎo)MK-2206和rapamycin聯(lián)合誘導(dǎo)的NB細胞
        3.4 細胞程序性壞死介導(dǎo)MK-2206和rapamycin聯(lián)合誘導(dǎo)的NB細胞
        3.5 MK-2206和rapamycin聯(lián)合誘導(dǎo)裸鼠NB腫瘤組織中的細胞死亡及自噬和程序性壞死相關(guān)分子變化
    4 討論
    5 結(jié)論
    參考文獻
第二部分 MK-2206和rapamycin聯(lián)合應(yīng)用治療神經(jīng)母細胞瘤的機制研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 細胞系
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器
        2.2 實驗方法
            2.2.1 細胞培養(yǎng)
            2.2.2 CCK-8細胞增殖檢測
            2.2.3 IncuCyte Zoom變焦活細胞成像
            2.2.4 細胞轉(zhuǎn)染siRNA(以6cm培養(yǎng)皿為例）
            2.2.5 質(zhì)粒提取
            2.2.6 細胞轉(zhuǎn)染質(zhì)粒(以6cm培養(yǎng)皿為例）
            2.2.7 Western Blot
            2.2.8 Seahorse能量代謝分析
            2.2.9 統(tǒng)計分析
    3 結(jié)果
        3.1 沉默MYCN基因可逆轉(zhuǎn)MK-2206和rapamycin聯(lián)合應(yīng)用誘導(dǎo)的細胞死亡
            3.1.1 在NGP、BE2細胞中轉(zhuǎn)染siRNA沉默MYCN基因
            3.1.2 沉默MYCN基因可逆轉(zhuǎn)MK-2206和rapamycin聯(lián)合應(yīng)用誘導(dǎo)的NB細胞死亡
        3.2 過表達MYCN可增加NB細胞對MK-2206和rapamycin聯(lián)合應(yīng)用的敏感性
            3.2.1 在AS、SY5Y細胞中轉(zhuǎn)染質(zhì)粒使MYCN基因過表達
            3.2.2 過表達MYCN可增加NB細胞對MK-2206和rapamycin聯(lián)合應(yīng)用的敏感性
        3.3 MK-2206和rapamycin聯(lián)合處理NGP細胞后糖酵解功能受損
        3.4 MYCN表達水平對NB細胞糖酵解及線粒體氧化磷酸化水平的影響
            3.4.1 MYCN表達水平對NB細胞糖酵解水平的影響
            3.4.2 MYCN表達水平對NB細胞線粒體氧化磷酸化水平的影響
            3.4.3 MYCN表達水平對NB細胞代謝潛力的影響
    4 討論
    5 結(jié)論
    參考文獻
本研究的創(chuàng)新性評價
綜述
    參考文獻
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Targeting uptake transporters for cancer imaging and treatment[J]. Yuchen Zhang,Joanne Wang.  Acta Pharmaceutica Sinica B. 2020(01)



本文編號：3207704