發(fā)布時間：2021-05-12 11:36

　　背景：促進血管生成是治療腦血管病的主要治療策略,促血管生成相關(guān)的基因（VEGF或Ang-1）治療是主要的研究方向,腺相關(guān)病毒2型（AAV2）以其固有的特點成為最為廣泛采用的病毒載體,隨著研究的深入和臨床實驗的開展,人們發(fā)現(xiàn)雖然AAV沒有致病性,但人群中普遍存在針對野生型AAV2的中和抗體,從而嚴(yán)重影響了以AAV2為載體的轉(zhuǎn)基因效率。此外AAV是一種單鏈DNA病毒,其目的基因的表達往往需要2-3周的時間,這對于對治療時間窗有重要要求的腦缺血性疾病也是極為不利的。間充質(zhì)干細胞因具有極低的免疫原性,同種異基因移植一般不誘導(dǎo)免疫排斥反應(yīng)；且間充質(zhì)干細胞具有很強的向病變區(qū)域趨化遷移功能,作為一種細胞載體已被廣泛用作基因的研究。目的：本研究擬觀察間充質(zhì)干細胞作為一種載體細胞腦內(nèi)移植后可否逃避野生型AAV致敏大鼠的免疫反應(yīng),從而實現(xiàn)目的基因的及時表達。方法：構(gòu)建AAV2-eGFP體外修飾大鼠骨髓來源間充質(zhì)干細胞使其穩(wěn)定表達eGFP,采用立體定向注射方法移植到野生型AAV致敏大鼠腦內(nèi),通過免疫熒光染色、Weston Blot等方法檢測細胞存活及eGFP表達情況。結(jié)果：AAV2-eGFP體外可有效轉(zhuǎn)染間... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
Abstract
縮略詞表
目錄
1 引言
2 材料與方法
    2.1 本實驗簡明技術(shù)路線圖如下
    2.2 實驗動物
    2.3 主要試劑及儀器
    2.4 大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞分離培養(yǎng)
    2.5 AAV2-eGFP構(gòu)建
    2.6 AAV2-eGFP體外轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細胞
    2.7 間充質(zhì)干細胞立體定向腦內(nèi)移植及AAV2-eGFP腦內(nèi)注射
    2.8 組織病理及免疫組化
    2.9 RT-PCR及Western Blot
    2.10 抗體滴度檢測
    2.11 統(tǒng)計學(xué)處理
3 結(jié)果
    3.1 rAAV2-eGFP體外轉(zhuǎn)染MSCs
    3.2 MSCs-eGFP腦內(nèi)移植
    3.3 RT-PCR和Western Blot檢測結(jié)果
    3.4 MSCs-eGFP腦內(nèi)移植或者rAAV2-eGFP注射后中和抗體滴度變化
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻
綜述
    參考文獻
作者簡歷



本文編號：3183341