目的通過構(gòu)建一種新型腺病毒載體,驗證腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體（TRAIL基因）治療膠質(zhì)瘤的療效,并證實新型載體的優(yōu)勢。方法經(jīng)美國華盛頓大學(xué)實驗室授權(quán)獲得Ad/35△E1-△E3,即E1和E3缺失的5型腺病毒纖維fiber被35型新型載體。利用基因重組,構(gòu)建出重組腺病毒質(zhì)粒Ad5/35△E1-△E3-TRAIL。氯化銫密度梯度離心純化Ad5/35△E1-△E3-TRAIL,并并測定病毒滴度。采用逆轉(zhuǎn)錄酶-多聚酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）、免疫熒光技術(shù)、蛋白質(zhì)印跡法（Western blot）分別檢測目的基因的表達(dá)。結(jié)果純化后Ad5/35△E1-△E3-TRAIL的病毒滴度為1.22×1015pfu/l。重組質(zhì)粒經(jīng)RT-PCR都擴(kuò)增出104 bp的基因片段。通過免疫熒光和Western blot等方法檢測到目的基因的高效表達(dá)。結(jié)論新型腺病毒載體質(zhì)粒Ad5/35△E1-△E3-TRAIL能夠高效的在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中表達(dá)。 

【文章來源】：中華神經(jīng)外科疾病研究雜志. 2014,13(04)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
材料與方法
    一、材料
    二、嵌合腺病毒載體的構(gòu)建
    三、重組腺病毒顆粒的包裝及擴(kuò)增
    四、重組腺病毒滴度測定
    五、體外病毒感染效率的檢測
    六、RT-PCR檢測基因的表達(dá)
    七、免疫熒光技術(shù)檢測TRAIL基因在U251細(xì)胞的表達(dá)
    八、Western blot檢測U251細(xì)胞轉(zhuǎn)染后TRAIL蛋白表達(dá)
    九、統(tǒng)計學(xué)方法
結(jié)果
    一、重組腺病毒Ad5/35△E1-△E3-TRAIL的包裝、擴(kuò)增與純化
    二、RT-PCR檢測TRAIL基因體外表達(dá)
    三、免疫熒光檢測TRAIL基因在U251細(xì)胞的表達(dá)
    四、Western blot分析TRAIL蛋白的表達(dá)
討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]5/35嵌合型溶瘤腺病毒SG635對肝癌細(xì)胞的抑制作用[J]. 武玉強,張琪,陳偉,劉煒,臺艷,陳規(guī)劃.  中國腫瘤生物治療雜志. 2011(04)
[2]人35型及11型腺病毒的研究進(jìn)展[J]. 陳東鋒,石文芳,錢其軍.  中國腫瘤生物治療雜志. 2006(06)



本文編號：3158537