目的探討不同濃度米諾環(huán)素對(duì)人類膠質(zhì)瘤U87和LN229細(xì)胞增殖及凋亡的影響和作用機(jī)制。方法（1）U87和LN229細(xì)胞設(shè)對(duì)照組（DMSO處理）,5μmol/L米諾環(huán)素組和10μmol/L米諾環(huán)素組,分組處理72 h后采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖水平,免疫熒光標(biāo)記檢測(cè)細(xì)胞自噬蛋白微管相關(guān)蛋白l輕鏈3B亞基（LC3B）表達(dá)水平,Western blot法檢測(cè)細(xì)胞自噬和凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)變化。（2）構(gòu)建沉默信息調(diào)節(jié)因子2相關(guān)酶1（SIRT1）-shRNA載體,觀察敲低SIRT1表達(dá)后,不同濃度米諾環(huán)素對(duì)U87和LN229細(xì)胞自噬的影響。結(jié)果 （1）與對(duì)照組相比,5μmol/L和10μmol/L米諾環(huán)素組細(xì)胞增殖能力下降,免疫熒光標(biāo)記顯示胞漿內(nèi)自噬標(biāo)記蛋白LC3B的表達(dá)增多,Western blot結(jié)果顯示哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）水平顯著降低,自噬基因相關(guān)蛋白5（Atg5）、磷酸化AMP依賴的蛋白激酶α亞基（p-AMPKα）、SIRT1水平顯著增加（P<0.05）。與對(duì)照組相比,10μmol/L米諾環(huán)素組B淋巴細(xì)胞瘤-2（Bcl-2）、磷酸化p70核糖體蛋白S6激酶（p-p70s6... 

【文章來(lái)源】：天津醫(yī)藥. 2020,48(09)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要材料
    1.2 不同濃度米諾環(huán)素處理后U87和LN229細(xì)胞增殖和凋亡相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)
        1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及分組
        1.2.2 MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力
        1.2.3 免疫熒光染色檢測(cè)LC3B的表達(dá)
        1.2.4 Western blot檢測(cè)自噬和凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)
    1.3 shRNA干擾SIRT1表達(dá)后觀察米諾環(huán)素對(duì)U87和LN229細(xì)胞自噬相關(guān)分子表達(dá)的影響
        1.3.1 SIRT1-shRNA載體構(gòu)建
        1.3.2 慢病毒包裝和轉(zhuǎn)染
        1.3.3 qPCR檢測(cè)shRNA干擾后SIRT1的表達(dá)
        1.3.4 Western blot檢測(cè)SIRT1敲低后細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)
    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1不同濃度米諾環(huán)素對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖能力的影響
    2.2不同濃度米諾環(huán)素對(duì)U87和LN229細(xì)胞自噬水平的影響
    2.3不同濃度米諾環(huán)素對(duì)U87和LN229細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
    2.4SIRT1敲低后米諾環(huán)素對(duì)U87和LN229細(xì)胞自噬水平的影響
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Minocycline protects against myocardial ischemia/reperfusion injury in rats by upregulating MCPIP1 to inhibit NF-κB activation[J]. Quan Yi,Fang-hui Tan,Jia-an Tan,Xiu-hui Chen,Qing Xiao,Ying-hua Liu,Gui-ping Zhang,Jian-dong Luo.  Acta Pharmacologica Sinica. 2019(08)
[2]米諾環(huán)素對(duì)人類膠質(zhì)瘤U87和LN229細(xì)胞體外增殖及凋亡的影響[J]. 趙海龍,嚴(yán)婉約,李巧巧,李科,劉麗,李麗娟.  遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2017(05)



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