目的建立α-突觸核蛋白（α-synuclein,α-syn）聚集及傳播的細(xì)胞和動(dòng)物模型,為帕金森病的發(fā)病機(jī)制研究提供基礎(chǔ)。方法親和層析法純化α-syn蛋白,體外誘導(dǎo)其聚集成為α-syn纖維（Preformed fibrils,PFFs）;培養(yǎng)穩(wěn)定表達(dá)GFP-α-syn的HEK293細(xì)胞系及原代神經(jīng)元,轉(zhuǎn)導(dǎo)α-synPFFs后免疫熒光染色法觀察細(xì)胞內(nèi)α-syn聚集情況;小鼠立體定位注射α-syn PFFs,免疫組織化學(xué)法檢測(cè)內(nèi)源性α-syn的聚集及傳播情況。結(jié)果純化的α-syn可在體外聚集形成聚集體;在細(xì)胞及動(dòng)物水平觀察到α-syn PFFs可誘導(dǎo)內(nèi)源性蛋白的聚集和傳播。結(jié)論本研究建立了α-syn聚集及傳播的細(xì)胞和動(dòng)物模型,為帕金森病的相關(guān)研究打下了基礎(chǔ)。 

【文章來(lái)源】：卒中與神經(jīng)疾病. 2020,27(06)

【文章頁(yè)數(shù)】：4 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組
    1.2 主要試劑及儀器
    1.3 α-syn純化及纖維制備
    1.4 α-syn PFFs轉(zhuǎn)導(dǎo)及細(xì)胞免疫熒光
    1.5 Western Blot及考馬斯亮藍(lán)染色
    1.6 透射電鏡
    1.7 小鼠腦立體定位注射
    1.8 小鼠灌注取材及免疫組織化學(xué)染色
    1.9 小鼠原代神經(jīng)元培養(yǎng)
2 結(jié) 果
    2.1 α-syn的純化及體外聚集
    2.2 α-syn PFFs誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)α-syn發(fā)生聚集
    2.3 α-syn PFFs誘導(dǎo)小鼠腦內(nèi)α-syn聚集
3 討 論



本文編號(hào)：3151638