目的:膠質母細胞瘤（Glioblastoma,GBM）是神經上皮源性腫瘤,按照WHO病理分級,GBM是惡性程度最高,侵襲性最強的惡性腦膠質瘤。盡管給予積極的手術治療,并輔助術后放療和化療,GBM患者的5年生存率仍小于5%,預后很差。GBM對化療的耐藥性和放療的抵抗性是影響療效的重要因素。目前,研究者們從基因組學、遺傳學和表觀遺傳學等多角度研究膠質母細胞瘤的發(fā)病機制,針對膠質母細胞瘤發(fā)病機制的研究已成為診斷和靶向治療的關鍵。非編碼RNAs（non-coding RNAs,ncRNAs）人類基因組中的多數(shù)基因的轉錄產物之一。一般分為短鏈非編碼RNAs和長鏈非編碼RNAs（long non-coding RNAs,lncRNAs）。其中,短鏈非編碼RNAs主要包括microRNAs（miRNAs）、short-interfering RNAs（siRNAs）和PIWI-interacting RNAs（piRNAs）。piRNAs一般通過與Argonaute蛋白家族的亞家族,即PIWIL蛋白亞家族結合,發(fā)揮基因沉默及調控和維持種系DNA穩(wěn)定的功能。LncRNAs的生物學功能主要表現(xiàn)在轉錄或者... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：123 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 PIWIL3/OIP5-AS1/miR-367-3p/CEBPA反饋環(huán)調控膠質瘤細胞生物學行為的機制研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 細胞株
            2.1.2 實驗動物
            2.1.3 主要試劑
            2.1.4 主要儀器
        2.2 實驗方法
            2.2.1 細胞培養(yǎng)與傳代
            2.2.2 細胞凍存
            2.2.3 細胞計數(shù)
            2.2.4 細胞增殖實驗
            2.2.5 細胞遷移實驗
            2.2.6 細胞侵襲實驗
            2.2.7 細胞凋亡實驗
            2.2.8 Trizol法提取RNA
            2.2.9 Real-time PCR方法分別檢測OIP5-AS1、CEBPA和 TRAF4 mRNA的表達變化
            2.2.10 慢病毒載體構建和感染
            2.2.11 細胞轉染
            2.2.12 雙熒光素酶報告基因分析實驗
            2.2.13 RNA免疫沉淀技術（RIP）
            2.2.14 RNA pull-down實驗
            2.2.15 Western blot方法
            2.2.16 染色質免疫共沉淀（ChIP）實驗
            2.2.17 裸鼠移植瘤實驗
        2.3 統(tǒng)計方法
    3 實驗結果
        3.1 在膠質瘤組織和細胞中PIWIL3和piR-30188 低表達,OIP5-AS1 高表達。過表達PIWIL3、piR-30188 以及沉默OIP5-AS1 的表達抑制膠質瘤細胞的惡性生物學行為
        3.2 PIWIL3 結合piR-30188,OIP5-AS1 靶向結合piR-30188 調節(jié)膠質瘤細胞生物學行為。miR-367-3p在膠質瘤組織和細胞中低表達,miR-367-3p靶向結合OIP5-AS1 調控膠質瘤細胞的惡性生物學行為
        3.3 PIWIL3、piR-30188、OIP5-AS1和miR-367-3p通過調控CEBPA和TRAF4影響膠質瘤細胞的生物學行為
        3.4 沉默OIP5-AS1 的表達聯(lián)合過表達miR-367-3p通過降低CEBPA和 TRAF4的表達抑制膠質瘤細胞的惡性生物學行為
        3.5 CEBPA與 TRAF4 的啟動子結合下調其表達,調控膠質瘤細胞的生物學行為
        3.6 miR-367-3p靶向結合CEBPA的3’UTR區(qū),調控膠質瘤細胞的生物學行為
        3.7 CEBPA與 PIWIL3 的啟動子區(qū)直接結合
        3.8 沉默OIP5-AS1 的表達與過表達PIWIL3、miR-367-3p的單獨和聯(lián)合應用抑制裸鼠移植瘤生長,顯著延長生存期
    4 討論
    5 結論
第二部分 TDP43/SNHG12/miR-195/SOX5 反饋環(huán)調控膠質瘤細胞生物學行為的機制研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 細胞株
            2.1.2 實驗動物
            2.1.3 組織標本
            2.1.4 主要試劑
            2.1.5 主要儀器
        2.2 實驗方法
            2.2.1 細胞培養(yǎng)與傳代
            2.2.2 細胞凍存
            2.2.3 細胞計數(shù)
            2.2.4 熒光原位雜交（FISH）
            2.2.5 逆轉錄和實時定量PCR（qRT-PCR）
            2.2.6 Western blot
            2.2.7 構建轉染細胞系
            2.2.8 細胞增殖實驗
            2.2.9 細胞遷移實驗
            2.2.10 細胞侵襲實驗
            2.2.11 細胞凋亡實驗
            2.2.12 雙熒光素酶報告基因分析實驗
            2.2.13 RNA免疫沉淀技術（RIP）
            2.2.14 RNA pull-down實驗
            2.2.15 半衰期檢測
            2.2.16 染色質免疫共沉淀實驗（ChIP）
            2.2.17 裸鼠移植瘤實驗
        2.3 統(tǒng)計方法
    3 實驗結果
        3.1 TDP43和SNHG12 在膠質瘤組織和細胞中高表達,沉默TDP43和SNHG12抑制膠質瘤細胞的惡性生物學行為,沉默TDP43 抑制SNHG12 的表達
        3.2 過表達miR-195 抑制膠質瘤細胞的增殖、遷移和侵襲,促進膠質瘤細胞凋亡
        3.3 miR-195與SNHG12 靶向結合,過表達miR-195 抑制SNHG12 的表達
        3.4 過表達miR-195 增強sh-SNHG12 對膠質瘤細胞惡性生物學行為的抑制作用
        3.5 SOX5 在膠質瘤組織和細胞中高表達,沉默SOX5 抑制膠質瘤細胞的惡性生物學行為
        3.6 miR-195 靶向結合SOX5的3'UTR并負性調控其表達
        3.7 低表達SOX5 能夠部分逆轉沉默miR-195 的表達對膠質瘤細胞惡性生物學行為的促進作用
        3.8 SOX5與Gelsolin的啟動子區(qū)結合,沉默SOX5 抑制Gelsolin的表達
        3.9 SOX5與SNHG12 的啟動子區(qū)結合,沉默SOX5 抑制SNHG12 的表達
        3.10 沉默TDP43 表達、沉默SNHG12 表達和過表達miR-195 單獨以及聯(lián)合應用抑制腫瘤在體內的生長并延長裸鼠生存期
    4 討論
    5 結論
    本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學位期間取得的研究成果
致謝
個人簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]lncRNA:腫瘤分子診斷中的一顆新星[J]. 李琪兒,葉國良,郭俊明.  中國生物化學與分子生物學報. 2014(03)
[2]轉錄因子與microRNA在基因表達調控中的功能聯(lián)系及差異[J]. 閆曉紅,王寧.  中國生物化學與分子生物學報. 2010(10)
[3]小干擾RNA逆轉人乳腺癌細胞MCF-7多藥耐藥的體外研究[J]. 莊曉明,肖紅,武卓.  中國臨床藥理學雜志. 2010(01)
[4]特異性小干擾RNA沉默Annexin Ⅱ基因表達對人乳腺癌細胞MDA-MB-231侵襲遷移力的影響[J]. 郭變琴,文陽安,陳婷梅.  重慶醫(yī)科大學學報. 2009(08)

博士論文
[1]長鏈非編碼RNA DMTF1v4（NR024549）在胃癌多藥耐藥中的作用及機制研究[D]. 王穎.第四軍醫(yī)大學 2012



本文編號：3142023