目的:在缺血性卒中的發(fā)病機制中,缺血腦組織內(nèi)的局部炎癥以及全身免疫抑制作用起著關(guān)鍵的作用,但是對于缺血后處理（Ischemia postconditioning,IPostC）是如何影響缺血腦組織的局部炎癥及中樞和外周免疫細(xì)胞的研究較少,相關(guān)機制還不十分明確。在本研究中,我們利用C57/BL6小鼠建立了IPostC模型,探索IPostC的神經(jīng)保護作用。通過使用質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)（CyTOF）,量化了缺血再灌注損傷后的免疫細(xì)胞表型,研究細(xì)胞表面標(biāo)記物的表達(dá)水平的變化,明確外周血和腦組織中免疫細(xì)胞相關(guān)的信號通路與缺血性卒中引起的神經(jīng)炎癥之間的關(guān)系。進一步闡述缺血后處理是如何影響缺血腦組織免疫細(xì)胞的浸潤,以及與卒中誘導(dǎo)的免疫抑制相關(guān)的淋巴細(xì)胞減少癥。在腦缺血再灌注損傷中,氧化應(yīng)激起著重要的作用。富馬酸二甲酯及其代謝產(chǎn)物富馬酸單甲酯是抗氧化劑,可以通過激活核因子紅細(xì)胞-2相關(guān)因子2（Nrf2）/血紅素加氧酶-1（HO-1）途徑從而誘導(dǎo)下游抗氧化蛋白的表達(dá)。在本研究中,我們進一步闡述了DMF在缺血性卒中急性和亞急性期對再灌注損傷的作用,以及這種作用是否與Nrf2途徑的激活相關(guān)。鑒于DMF與MMF有... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：132 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

IPostC減小梗死體積和改善神經(jīng)功能缺損評分

外側(cè)紋狀體（區(qū)域 2）。側(cè)支循環(huán)供應(yīng)示意圖。（C）在缺血 15 分鐘時，只有輕微的皮質(zhì)下?lián)p傷，見于背外側(cè)紋狀體。缺血 30 分鐘時，梗死迅速增加并且明顯在腹內(nèi)側(cè)紋狀體。缺血 45 分鐘時觀察到嚴(yán)重的皮質(zhì)損傷。1.2.3 缺血后處理抑制了腦內(nèi)病灶側(cè)皮層區(qū)域的炎癥水平為了進一步明確缺血后處理是否能有效減輕腦內(nèi)不同區(qū)域的炎癥水平，我們將小鼠腦組織分為病灶側(cè)皮層和病灶側(cè)基底節(jié)區(qū)兩部分。結(jié)果表明，在梗死側(cè)半球，皮層的炎癥因子升高的水平要高于基底節(jié)區(qū)，IPostC明顯抑制了同側(cè)皮層TNF-α，IL-1β，IL-6的表達(dá)水平。只有CCL2在同側(cè)皮層和基底節(jié)都被抑制（圖4）。我們的結(jié)果提示，在腦缺后，梗死側(cè)皮層的炎癥反應(yīng)最活躍，這可能跟這一區(qū)域側(cè)枝循環(huán)豐富，再灌注損傷更加嚴(yán)重有關(guān)，而IPostC可以明顯抑制這一區(qū)域的炎癥水平。

質(zhì)譜流式細(xì)胞儀的核心是兩個實驗平臺的融合：流式細(xì)胞術(shù)和元素質(zhì)譜分析法（圖 1）。常規(guī)流式細(xì)胞術(shù)利用熒光團作為標(biāo)記，通過量化發(fā)射光來定量分析分子的表達(dá)。但是，熒光團發(fā)射光譜較寬，相互間有重疊，當(dāng)單一實驗中有多個參數(shù)時就更難以區(qū)分，因此需要復(fù)雜的補償計算來解決光譜重疊問題。相反，元素質(zhì)譜是能夠精準(zhǔn)的區(qū)分不同原子量的同位素。質(zhì)譜流式細(xì)胞術(shù)利用了耦合探針與穩(wěn)定的重金屬同位素相連。從而將特定質(zhì)譜通道中檢測到的離子信號轉(zhuǎn)變成分子信號表達(dá)，幾乎沒有參數(shù)間的信號重疊，省去了復(fù)雜的補償計算。當(dāng)進行質(zhì)譜流式細(xì)胞實驗時，感興趣的細(xì)胞首先與具有親和力的抗體混合物進行孵育。這些抗體先前已被結(jié)合到純化的穩(wěn)定的重金屬同位素上[91, 92]。這些探針與目的細(xì)胞表面和/或細(xì)胞內(nèi)結(jié)合。然后將單細(xì)胞懸液通過噴霧器進入質(zhì)譜流式細(xì)胞儀中。進入儀器后，細(xì)胞穿過氬氣等離子體，其中共價鍵被打破，產(chǎn)生自由離子。離子云通過一個四極桿以去除共同的生物元素，富集成重金屬信號離子，在質(zhì)譜儀中通過它們的質(zhì)荷比分開。離子計數(shù)轉(zhuǎn)換為電信號，這些信號被整合轉(zhuǎn)化為單細(xì)胞事件供分析（圖 5）。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Inflammation, oxidative stress and renin angiotensin system in atherosclerosis[J]. Kazim Husain,Wilfredo Hernandez,Rais A Ansari,Leon Ferder.  World Journal of Biological Chemistry. 2015(03)



本文編號：3075348