目的:1、評(píng)價(jià)mi R-338-5p在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)水平及其與膠質(zhì)瘤患者臨床病理特征之間的關(guān)系;2、探索mi R-338-5p在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的作用,尋找其作用靶基因,為膠質(zhì)瘤診斷和治療研究提供新靶點(diǎn);3、引入噬菌體展示肽庫(kù)技術(shù),篩選和鑒定具有靶向能力的高親和特異性多肽;4、核素標(biāo)記、合成探針,與荷瘤鼠中評(píng)價(jià)中選小肽的腫瘤靶向性。材料與方法:運(yùn)用q RT-PCR的方法檢測(cè)了膠質(zhì)瘤及其正常腦組織標(biāo)本中mi R-338-5p的表達(dá);通過(guò)脂質(zhì)體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染法,將mi R-338-5p mimics導(dǎo)入膠質(zhì)瘤細(xì)胞T89G和U87中,提高內(nèi)源性mi R-338-5p的表達(dá)后,使用CCK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)mi R-338-5p對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖能力的影響;利用生物信息學(xué)工具,預(yù)測(cè)了與mi R-338-5p作用的位點(diǎn)在CTBP2的3’UTR區(qū)域,利用熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)證實(shí)該結(jié)合位點(diǎn)。通過(guò)CCK8實(shí)驗(yàn)和Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)探索CTBP2是否是mi R-338-5p的直接作用靶基因。通過(guò)對(duì)比CTBP2特定序列尋找CTBP2特異性親和配體。獲得特定序列后,將其列為靶分子特異性結(jié)合的肽段,用于篩選... 

【文章來(lái)源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

miRNA分子的生物合成示意圖

V 級(jí)別膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本中 miRNA-338-5p 相對(duì)表達(dá)量為0.31±0.14。正常組織 miRNA-338-5p 表達(dá)量顯著高于膠質(zhì)瘤組織（p=0.01）。（圖2.1）我們將相對(duì)表達(dá)量大于等于 0.55 定義為高表達(dá)，將相對(duì)表達(dá)量低于 0.55 定義為低表達(dá)。并與膠質(zhì)瘤的各種臨床病理特征進(jìn)行了相關(guān)性分析。我們發(fā)現(xiàn)，miRNA-338-5p 的相對(duì)表達(dá)量與膠質(zhì)瘤的 WHO 分級(jí)相關(guān)（p=0.006），與 Karnofsky表現(xiàn)值相關(guān)（p=0.007）。（表 2.1）圖 2.1 正常組織與膠質(zhì)瘤組織 miRNA-338-5p 相對(duì)表達(dá)量的比較

3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.3.1 m i R-338-5p 對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖能力的影響生長(zhǎng)情況膠質(zhì)瘤系T98G和U87中于6孔板中瞬時(shí)轉(zhuǎn)染miR-338-5p mimics和陰性對(duì)照24小時(shí)之后進(jìn)行胰酶工作液消化處理（傳代），重新鋪種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板板中（1500個(gè)細(xì)胞/孔），置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中，并分別在培養(yǎng)的第0小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)和96小時(shí)加入CCK-8試劑（每孔10 μL），將培養(yǎng)細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)箱中充分孵育3小時(shí)后，采用分光光度計(jì)測(cè)定每個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)孔的OD值。細(xì)胞培養(yǎng)的對(duì)照研究結(jié)果表明，膠質(zhì)瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)染mimics上調(diào)miR-338-5p的表達(dá)水平后，與對(duì)照組相比，腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)趨勢(shì)明顯受到抑制（P<0.05，如圖3所示）。細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)示miR-338轉(zhuǎn)染入U(xiǎn)87和T98G后的細(xì)胞增殖明顯減低（P<0.05，圖3.2 A-B）。


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