第一部分 EAE模型小鼠腦組織和體外用IL-17刺激星形膠質細胞誘導下調的microRNA及其上調的Hif1α的表達分析目的:探討EAE模型小鼠的腦組織和體外用IL-17刺激星形膠質細胞后,其microRNA（miRNA）和轉錄因子,即缺氧誘導因子 1α（hypoxia inducible factor 1α,Hif1α）的表達變化。方法:用髓鞘少突膠質細胞糖蛋白（myelin oligodendrocyte glycoprotein,MOG）注射復制小鼠實驗性自身免疫性腦脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）模型并予鑒定,同時在體外培養(yǎng)和鑒定C57BL/6小鼠的原代星形膠質細胞;通過miRNA芯片篩查分析EAE模型小鼠發(fā)病14d、20d時腦組織中（體內）及用IL-17刺激小鼠原代星形膠質細胞（體外）后3h、6h,下調miRNA表達譜的變化,并找出體內外共表達下調的miRNA;另在EAE小鼠建模后7d、14d、18d和20d和在IL-17刺激小鼠星形膠質細胞后3h、6h、12h、24h和48h,行Western blot方法... 

【文章來源】：南京醫(yī)科大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：106 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２?ＭＯＧ３５＿５５抗原誘導不同時間ＥＡＥ小鼠的神經功能評分情況

ＭＯＧ３５＿５５抗原誘導后１８？２０ｄ的發(fā)病高峰期，在ＥＡＥ小鼠腦組織與脊髓組??織中有大量的炎癥細胞浸潤，尤其在小血管周圍呈現(xiàn)典型的“袖套”樣改變??（圖３Ｂ，Ｄ），但無論是在腦組織還是脊髓組織，ＰＢＳ對照組均未見病理??學的異常改變。提示，小鼠ＥＡＥ模型復制成功。??Ａ?Ｂ?＼?ｙｌ??廣？?．?了二?，．，．?入－，?？??圖３光鏡觀察ＥＡＥ小鼠的病理學改變（ＨＥ染色，Ａ、Ｃ、Ｄｘ２００；?Ｂｘ４００）?Ａ．??ＰＢＳ對照小鼠腦組織；Ｂ．?ＥＡＥ小鼠腦組織；Ｃ．?ＰＢＳ對照小鼠的脊髓組織；Ｄ．?ＥＡＥ??小鼠的脊髓組織。??２０??

為了進一步確定ＥＡＥ小鼠髓鞘損傷的情況，我們通過電鏡觀察了髓鞘??的超微結構改變。結果顯示，ＰＢＳ對照組的髓鞘致密、均一；而ＥＡＥ組小??鼠的髓鞘明顯損傷，呈現(xiàn)松散、斷裂的病理學改變（圖４）。??ｍｍ??圖４?ＥＡＥ小鼠髓鞘超微結構的改變（Ａ．?ＰＢＳ組；Ｂ．?ＥＡＥ組）。電鏡下觀察小??鼠髓鞘超微結構的改變顯示，ＥＡＥ組小鼠的髓鞘呈現(xiàn)松散、斷裂。??二、小鼠星形膠質細胞的原代培養(yǎng)與鑒定??星形膠質細胞經體外傳代培養(yǎng)后，置于倒置顯微鏡下觀察，其胞漿豐??富且核漿較少，形狀多不規(guī)則，胞體分支多，胞核為橢圓形，常常偏于胞??體一側。用兔抗ＧＦＡＰ多克隆抗體進行免疫細胞化學染色及免疫熒光染色??鑒定，可見培養(yǎng)的星形膠質細胞ＧＦＡＰ的表達定位于胞漿。按照陽性細胞??率（陽性細胞數(shù)／總細胞數(shù)）ｘｌ〇〇％，每張切片統(tǒng)計５個視野，分別計數(shù)陽??性細胞的個數(shù)和細胞總數(shù)，計算出ＧＦＡＰ陽性率可達９０％以上（圖５）。??？系．??２１??

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3035007