目的表觀遺傳學(xué)修飾的DNA甲基化在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。腫瘤細胞的發(fā)生常存在多基因的異常甲基化現(xiàn)象，尤其是抑癌基因的高甲基化與腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。本研究旨在采用巢氏聚合酶鏈反應(yīng)（nPCR法）和亞硫酸氫鹽修飾后測序法（BSP法）方法檢測腦膠質(zhì)瘤組織中候選抑癌基因ppENK基因啟動子區(qū)的甲基化狀態(tài)，探討ppENK基因啟動子的異常甲基化水平在腦膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展中的作用以及與臨床病理資料之間的關(guān)系。方法采用巢式聚合酶鏈反應(yīng)（nested polymerase chain reaction nPCR）方法和亞硫酸氫鹽修飾后測序法（Bisulfite sequence polymerase chain reaction BSP），檢測32例腦膠質(zhì)瘤組織和10例正常腦組織中ppENK基因啟動子區(qū)CpG島的甲基化狀態(tài)。利用所學(xué)統(tǒng)計學(xué)方法分析ppENK基因啟動子的異常甲基化水平與臨床病例資料（病理分級、年齡、性別、病理分型）之間的關(guān)系。本實驗中32例腦膠質(zhì)瘤標本均經(jīng)病理證實,術(shù)前未進行放療或化療。10例正常腦組織標本來源腦外傷顱內(nèi)減壓手術(shù)患者。結(jié)果10例正常腦組織中未檢測到ppENK基因... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：37 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

標本組織DNA提取后對DNA質(zhì)量進行檢測電泳圖（1-6標本組織，N1-H2O陰性對照M-DNA片段Marker）

標本組織 DNA 提取后對 DNA 質(zhì)量進行檢測電泳圖（1-6 標本組織，N1-H2O M-DNA 片段 Marker） Results of inspection Genomic DNA after extraction quality (1 to 6 were tissues, Ntive water control, Lane M was DNA marker)1 2 3 4 5 6 N1 M1 2 3 4 5 6 N2 M400bp200bp

Fig 2 Results of amplification by electrophoresis (1 to 6 were tissues, N2 were negative watercontrol, Lane M was DNA marker)2.3.4 產(chǎn)物測序結(jié)果(Sequencing result)根據(jù) BSP 方法對擴增 PCR 產(chǎn)物進行測序，根據(jù)測序結(jié)果可確定目的片段內(nèi)每個 CpG 島中胞嘧啶(C)的甲基化狀態(tài)，是目前檢測目的基因啟動子區(qū) CpG島甲基化水平的金標準。本實驗測序工作由上海生物芯片公司協(xié)助完成，主要儀器為 ABI 3730XL 全自動 DNA 測序儀(遺傳分析儀)。測序的主要原理：若原基因序列 CpG 島中的 C 即胞嘧啶發(fā)生了甲基化反應(yīng)，則經(jīng)亞硫酸氫鹽修飾測序后胞嘧啶 C 保持不變(如圖 3)；若原基因序列中 CpG 島未發(fā)生甲基化反應(yīng)，則經(jīng)亞硫酸氫鹽修飾、PCR 擴增和測序后原胞嘧啶 C 轉(zhuǎn)變?yōu)樾叵汆奏?T(如圖 4)。

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3030943