目的:癲癇是由大腦神經(jīng)元異常放電引起的神經(jīng)系統(tǒng)疾病,發(fā)病過(guò)程中神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)處于興奮-抑制失衡的狀態(tài)。癲癇病因有很多,遺傳因素為原發(fā)性癲癇的主因,腦出血、腦腫瘤、腦外傷、炎癥、感染等是導(dǎo)致繼發(fā)性癲癇發(fā)生的常見(jiàn)原因�，F(xiàn)已有許多有研究報(bào)道CNTNAP2基因的異常與癲癇的發(fā)生有關(guān),其編碼的蛋白Caspr2參與了中樞神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)興奮性的調(diào)節(jié)過(guò)程。我們?cè)谂R床癲癇病例中亦發(fā)現(xiàn)了一個(gè)新的突變CNTNAP2（R777G）,我們推測(cè)Caspr2很可能參與調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)興奮-抑制平衡系統(tǒng),而當(dāng)發(fā)生基因突變時(shí),神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)興奮傳導(dǎo)異常,很有可能會(huì)引起癲癇發(fā)生。因此,本研究初步探究Caspr2對(duì)神經(jīng)元形態(tài)結(jié)構(gòu)與興奮性功能的影響,給癲癇發(fā)病機(jī)制的研究提供理論基礎(chǔ)。方法:我們構(gòu)建了帶綠色熒光的人源野生型CNTNAP2基因與突變?nèi)嗽碈NTNAP2（R777G）基因的質(zhì)粒,分別轉(zhuǎn)染至細(xì)胞系HEK293T、SH-SY5Y和小鼠原代培養(yǎng)神經(jīng)元中,通過(guò)Western blot與熒光定量PCR檢測(cè)人源野生型Caspr2與突變蛋白Caspr2（R777G）的表達(dá)情況;通過(guò)熒光顯微鏡觀察小鼠原代培養(yǎng)神經(jīng)元過(guò)表達(dá)野生型Caspr2或突變蛋白Cas... 

【文章來(lái)源】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)廣東省

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
第一章 癲癇的研究現(xiàn)狀
    1.1 癲癇的定義
    1.2 癲癇的病因
        1.2.1 原發(fā)性癲癇
        1.2.2 繼發(fā)性癲癇
    1.3 癲癇的發(fā)病機(jī)制
        1.3.1 基因突變與離子通道異常
        1.3.2 神經(jīng)遞質(zhì)異常
        1.3.3 免疫及炎癥因素
        1.3.4 神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞
第二章 Caspr2蛋白的研究現(xiàn)狀
    2.1 Caspr2的分子結(jié)構(gòu)
    2.2 Caspr2的主要功能
        2.2.1 在髓鞘近結(jié)側(cè)區(qū)募集Kv1.1、Kv1.2
        2.2.2 參與神經(jīng)元的遷移
        2.2.3 參與神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的正�；顒�(dòng)
    2.3 Caspr2在人與鼠腦中的不同分布與表達(dá)
    2.4 Caspr2與癲癇聯(lián)系密切
    2.5 CN7NAP2基因新突變位點(diǎn)及病例背景
第三章 材料與方法
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 動(dòng)物及飼養(yǎng)條件
        3.1.2 細(xì)胞
        3.1.3 抗體
        3.1.4 化學(xué)藥品和材料、試劑盒及培養(yǎng)基
        3.1.5 主要試劑與溶液的配制
        3.1.6 主要實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 質(zhì)粒構(gòu)建
        3.2.2 大量提取無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒
        3.2.3 pEGFP-N1-CNTNAP2 （R777G）質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2.4 細(xì)胞分離及培養(yǎng)
        3.2.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        3.2.6 蛋白質(zhì)免疫印跡
        3.2.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        3.2.8 電生理技術(shù)
        3.2.9 數(shù)據(jù)分析
第四章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
    4.1 質(zhì)粒構(gòu)建成功
        4.1.1 pEGFP-N1-CNTNAP2質(zhì)粒構(gòu)建
        4.1.2 pEGFP-N1-CNTNAP2 （R777G）質(zhì)粒構(gòu)建
    4.2 細(xì)胞系轉(zhuǎn)染成功
    4.3 Caspr2與神經(jīng)元形態(tài)異常
    4.4 Caspr2與神經(jīng)元興奮性異常
結(jié)語(yǔ)
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
統(tǒng)計(jì)學(xué)審核證明


【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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