本文關(guān)鍵詞：脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞Pannexin1在神經(jīng)病理性疼痛大鼠中的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景與目的神經(jīng)病理性疼痛(Neuropathic pain,NP)是常見(jiàn)但卻缺乏有效治療手段的臨床綜合征。國(guó)際疼痛協(xié)會(huì)在最新召開(kāi)的年會(huì)上對(duì)其最新的定義是“創(chuàng)傷或疾病累及軀體感覺(jué)系統(tǒng)后直接導(dǎo)致的疼痛”[1]。臨床上以自發(fā)痛、誘發(fā)痛、痛覺(jué)過(guò)敏、疼痛異常以及痛覺(jué)超敏為其典型特點(diǎn)[2]。NP是多由外周神經(jīng)損傷引起,也可因中樞神經(jīng)系統(tǒng)的病變導(dǎo)致,其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,分子機(jī)制尚不完全清楚,近年來(lái)一直是疼痛領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。由于疼痛的緩解機(jī)制還不清楚,雖然臨床上有大量的藥物正在治療NP,但是效果都不是特別理想。近年來(lái),膠質(zhì)細(xì)胞被發(fā)現(xiàn)在神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生和維持中起著重要的作用,星形膠質(zhì)細(xì)胞正在被重新認(rèn)識(shí),探索其激活的分子機(jī)制有可能為臨床疼痛治療提供新的思路。Pannexin通道蛋白是一類縫隙連接蛋白(gap junctions,GJs),目前發(fā)現(xiàn)存在三種亞型,廣泛存在于全身大部分組織中,尤其在神經(jīng)系統(tǒng)中大量表達(dá)[3]。它能連接兩個(gè)相鄰細(xì)胞,也能形成半通道與細(xì)胞外液相通,能夠?qū)崿F(xiàn)離子及代謝小分子物質(zhì)在細(xì)胞和組織液間的快速交換。有研究發(fā)現(xiàn),星形膠質(zhì)細(xì)胞上Pannexin1(PX1)半通道能夠通過(guò)控制ATP的釋放和調(diào)節(jié)鈣離子的內(nèi)流,影響星形膠質(zhì)細(xì)胞的激活狀態(tài)[4]。本研究旨在通過(guò)建立坐骨神經(jīng)分支選擇性結(jié)扎模型(spared nerve injury,SNI),觀察大鼠脊髓背角PX1的表達(dá)變化以及通過(guò)鞘內(nèi)注射縫隙連接阻斷劑甘珀酸,分析PX1半通道與星形膠質(zhì)細(xì)胞的關(guān)系。主要技術(shù)路線和方法1.雄性SD大鼠24只隨機(jī)分為假手術(shù)組(sham組,n=4)、對(duì)照組(WT組,n=4)和坐骨神經(jīng)分支選擇性損傷組(SNI組,n=16)。在術(shù)前、術(shù)后3、5、7、14天各時(shí)間點(diǎn)測(cè)定大鼠右側(cè)后爪的50%機(jī)械痛縮足閾值(mechanical withdrawal threshold,MWT)。WT組和sham組大鼠均在術(shù)后7天處死,SNI組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)各取4只老鼠處死,均取脊髓L3~L6段用Western blot法檢測(cè)PX1蛋白的表達(dá)水平。2.雄性SD大鼠32只隨機(jī)分為sham組16只和SNI組16只,所有大鼠均在術(shù)前、術(shù)后3、5、7、14天各時(shí)間點(diǎn)測(cè)定大鼠右側(cè)后肢的50%MWT。行為學(xué)測(cè)試后,sham組和SNI組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)各取4只處死,取脊髓L3~L6段進(jìn)行免疫組化染色,檢測(cè)脊髓背角內(nèi)膠質(zhì)纖維酸性蛋白質(zhì)(GFAP)的表達(dá)水平。3.雄性SD大鼠20只隨機(jī)分為A組、B組、C組和D組,所有大鼠均于建模前先進(jìn)行鞘內(nèi)置管。A組:空白大鼠+注射生理鹽水20u L;B組:sham大鼠+注射生理鹽水20u L;C組:SNI大鼠+注射生理鹽水20uL;D組:SNI大鼠+注射甘珀酸(CBX)20uL,所有大鼠均連續(xù)注射7天,每天一次。在注射前、注射后3、5、7天測(cè)定大鼠右側(cè)后爪的MWT值,并在注射7天后取脊髓L3~L6段進(jìn)行免疫組化染色,檢測(cè)脊髓背角內(nèi)GFAP的表達(dá)水平。結(jié)果1.WT組及sham組大鼠各時(shí)間點(diǎn)MWT值比較無(wú)明顯變化。SNI組大鼠MWT值在術(shù)后3天開(kāi)始降低,在第7天達(dá)到最低值,第14天有所恢復(fù),但仍低于術(shù)前(P0.05);SNI組各時(shí)間點(diǎn)MWT值較WT組和sham組均有明顯差異(P0.05)。而SNI組大鼠脊髓背角內(nèi)PX1表達(dá)增多,并隨時(shí)間增強(qiáng),明顯高于對(duì)照組和sham組(P0.05);SNI組脊髓背角內(nèi)GFAP表達(dá)較WT組、sham組明顯增強(qiáng),各時(shí)間點(diǎn)均有差異(P0.05)。WT組及sham組脊髓背角的PX1和GFAP表達(dá)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.A、B兩組各時(shí)間點(diǎn)MWT值比較無(wú)明顯變化。C組D組注射后各時(shí)間點(diǎn)MWT值均明顯低于A、B組(P0.05)。D組注射后3天的MWT值與C組比較無(wú)差異,但是5天、7天所測(cè)的值要高于C組。免疫組化顯示,C、D兩組GFAP陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)水平較A、B組高,但是D組各時(shí)間點(diǎn)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)表達(dá)較C組均有明顯下調(diào),且存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論GFAP作為星形膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志,其在SNI組中表達(dá)上調(diào)以及大鼠右后肢MWT值的改變,說(shuō)明手術(shù)建立疼痛模型的成功�？p隙連接蛋白PX1在SNI組中表達(dá)的上調(diào)提示其可能參與了神經(jīng)病理性疼痛的激活。而在鞘內(nèi)使用縫隙連接阻斷劑后能夠提高大鼠右后肢的MWT值,且下調(diào)脊髓背角GFAP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù),提示PX1半通道可能在調(diào)節(jié)神經(jīng)病理性疼痛中起著重要作用。
【關(guān)鍵詞】：神經(jīng)病理性疼痛 縫隙連接蛋白 Pannexin 星形膠質(zhì)細(xì)胞 甘珀酸 膠質(zhì)纖維酸性蛋白質(zhì)
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R741
【目錄】：

• 英文縮寫(xiě)一覽表4-5
• 英文摘要5-8
• 中文摘要8-11
• 第一章 前言11-12
• 第二章 總材料與方法12-20
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料12-14
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法14-20
• 第三章 神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓背角PX1 和GFAP的表達(dá)變化20-28
• 3.1 材料和方法20-21
• 3.2 結(jié)果21-25
• 3.3 討論25-28
• 第四章 鞘內(nèi)注射縫隙連接阻斷劑CBX對(duì)大鼠疼痛行為學(xué)的改變和脊髓背角GFAP的表達(dá)影響28-35
• 4.1 材料和方法28-29
• 4.2 結(jié)果29-32
• 4.3 討論32-35
• 全文小結(jié)35-37
• 附錄37-40
• 參考文獻(xiàn)40-43
• 文獻(xiàn)綜述Pannexin縫隙連接蛋白的研究作用進(jìn)展43-52
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 攻讀碩士期間發(fā)表的文章52-53
• 致謝53

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本文編號(hào)：300507