目的:探究pLL3.7-CMV-LMO3-IRES-puro重組慢病毒對(duì)膠質(zhì)瘤SHG44細(xì)胞生物學(xué)功能的影響及可能作用機(jī)制,為防治膠質(zhì)瘤惡變提供理論依據(jù)。方法:1.將LMO3基因構(gòu)建至p LL3.7-CMV-IRES-puro載體,進(jìn)行慢病毒的包裝,以慢病毒感染膠質(zhì)瘤SHG44細(xì)胞株。嘌呤霉素篩選LMO3雙標(biāo)簽過(guò)表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)株和對(duì)照穩(wěn)轉(zhuǎn)株;2.將細(xì)胞分為Control組、Vector組及LMO3組,采用CCK8、EdU試劑盒和流式細(xì)胞儀檢測(cè)膠質(zhì)瘤SHG44細(xì)胞增殖活性和細(xì)胞周期分布情況;3.通過(guò)細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)在顯微鏡下觀察和記錄24 h,48 h每一組細(xì)胞的傷口愈合情況,判斷膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移能力;4.裸鼠皮下分別接種LMO3組和Vector組膠質(zhì)瘤SHG44細(xì)胞,觀察裸鼠成瘤能力及腫瘤質(zhì)量來(lái)評(píng)估LMO3表達(dá)變化對(duì)裸鼠成瘤能力的影響。5.分別用MAPK的激動(dòng)劑hEGF和抑制劑U0126與PD98059刺激各組膠質(zhì)瘤SHG44細(xì)胞,一部分用于EdU檢測(cè)hEGF、U0126處理后SHG44細(xì)胞的增殖能力;另一部分收集細(xì)胞運(yùn)用Western Blot技術(shù)檢測(cè)LMO3過(guò)表達(dá)后MEK1、p-MEK1、E... 

【文章來(lái)源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

LMO3過(guò)表達(dá)株的鑒定

pLL3.7-CMV-LMO3-IRES-puro 重組慢病毒對(duì) SHG44 細(xì)胞(注:與 Control 組比較，*P<0.05) 法檢測(cè) pLL3.7-CMV-LMO3-IRES-puro 重組慢病毒CK8 結(jié)果，選取貼壁 72 h 后的 SHG44 細(xì)胞，EdU 檢原理是：熒光染料 Apollo 通過(guò)與 EdU 特異性反應(yīng)，法。結(jié)果顯示：LMO3 組的細(xì)胞陽(yáng)性率(0.290±33l0.043)，Vector 組(0.413±0.024)表明 LMO3 表達(dá)上4 細(xì)胞的增殖活性見圖 4-3。

圖 4-2 pLL3.7-CMV-LMO3-IRES-puro 重組慢病毒對(duì) SHG44 細(xì)胞增值率的影響(注:與 Control 組比較，*P<0.05)4.2.2 EdU 法檢測(cè) pLL3.7-CMV-LMO3-IRES-puro 重組慢病毒對(duì) SHG44 增殖活性的影響依據(jù) CCK8 結(jié)果，選取貼壁 72 h 后的 SHG44 細(xì)胞，EdU 檢測(cè)細(xì)胞的增殖能力。其主要原理是：熒光染料 Apollo 通過(guò)與 EdU 特異性反應(yīng)，觀察細(xì)胞 DNA復(fù)制活性的方法。結(jié)果顯示：LMO3 組的細(xì)胞陽(yáng)性率(0.290±0.043)顯著低于Control 組(0.433l0.043)，Vector 組(0.413±0.024)表明 LMO3 表達(dá)上調(diào)顯著抑制了膠質(zhì)瘤 SHG44 細(xì)胞的增殖活性見圖 4-3。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：2996018