目的：研究多巴胺（Dopamine, DA）對多巴胺細胞的損傷影響和醌氧化還原酶（Quinone oxidoreductase, NQO1）對多巴胺細胞損傷的保護作用,進一步尋求帕金森病發(fā)病機理與相關的防治措施。方法：通過改變培養(yǎng)條件和添加細胞因子構建多巴胺細胞模型；運用免疫組織化學方法和免疫熒光方法檢測神經(jīng)元和多巴胺神經(jīng)細胞的特異性蛋白微管結合蛋白（Microtubule-associated protein2, MAP2）和酪氨酸羥化酶（Tyrosine hydroxylase, TH）;運用單核細胞直接細胞毒性測定（mono-nuclear cell direct cytotoxicity assay, MTT）方法檢測多巴胺對細胞活性的影響；運用蛋白質(zhì)印跡（Western Blot）方法檢測細胞內(nèi)蛋白表達變化情況,并通過醌蛋白檢測方法（氯化硝基四氮唑藍NBT/甘氨酸法）檢測不同條件下細胞內(nèi)的醌化蛋白含量變化；運用腺病毒載體構建高表達NQO1的原代細胞。運用SF誘導整體動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)高表達NQO1并通過腦片免疫組織化學和、Vestern Blot方法檢測NQO1的表達量變化。結... 

【文章來源】：華東師范大學上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
第一章 細胞模型的建立
    1 材料和方法
        1.1 實驗材料
        1.2 實驗方法
    2 結果
        2.1 SHSY5Y細胞系模型的建立
        2.2 原代細胞模型的建立
    3 討論
第二章 DA對細胞的損傷作用
    1 材料和方法
        1.1 實驗材料
        1.2 實驗方法
    2 結果
        2.1 DA對SH-SY5Y細胞和誘導后細胞的毒性影響
        2.2 DA對原代細胞的損傷
    3 討論
第三章 NQO1對原代神經(jīng)細胞DA毒性的保護
    1 材料和方法
        1.1 實驗材料
        1.2 實驗方法
    2 結果
        2.1 SF預處理后原代TH神經(jīng)細胞對于DA損傷后的數(shù)量變化
        2.2 NQO1蛋白表達量變化的Western Blot檢測
        2.3 細胞內(nèi)醌蛋白檢測
        2.4 免疫熒光檢測NQO1-腺病毒感染后NQO1表達效果
        2.5 WB檢測腺病毒感染細胞系后的表達情況
        2.6 感染NQO1-腺病毒對DA損傷后TH陽性細胞數(shù)量的影響
        2.7 原代細胞中NQO1的表達
        2.8 SF誘導后原代細胞中NQO1的表達
        2.9 腺病毒表達后NQO1的陽性細胞以及在細胞中的定位
    3 討論
第四章 SF在動物水平上的作用
    1 材料和方法
        1.1 實驗材料
        1.2 實驗方法
    2 結果
        2.1 SF誘導大鼠腦內(nèi)NQO1蛋白表達情況
    3 討論
綜述 線粒體損傷和氧化應激
    線粒體呼吸鏈和氧化有關的問題
    在老年大腦和神經(jīng)變性疾病中線粒體DNA變化和氧化應激
    在小鼠體內(nèi)線粒體DNA缺失導致老化和氧化應激
    活性氧對線粒體DNA突變的影響
    復合體Ⅰ,氧化應激和帕金森病
    復合物Ⅰ缺失對在帕金森病中氧化應激和神經(jīng)變性的影響
    復合物Ⅰ缺失在帕金森病的起源
    結論
全文結論
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]6-OHDA制作帕金森病大鼠模型及評估[J]. 張偉,楊輝.  四川醫(yī)學. 2007(08)
[2]帕金森病發(fā)病機制的研究[J]. 郝斌,周曉平.  中國藥物與臨床. 2004(07)
[3]NQO1與腫瘤[J]. 代恩勇.  國外醫(yī)學.遺傳學分冊. 2003(03)
[4]NQO1酶及其被氧環(huán)境誘導表達的研究進展[J]. 夏小俊,金中初.  生理科學進展. 2002(03)
[5]多巴胺抑制PC12細胞增殖和誘導凋亡作用的研究[J]. 李立宏,高國棟,張寶國,王學廉,李向忠.  中風與神經(jīng)疾病雜志. 2001(01)



本文編號：2971420