研究目的膠質(zhì)母細胞瘤是最常見、也是惡性程度最高的一種星型細胞瘤,平均生存期為15個月。轉(zhuǎn)錄調(diào)控異常在多形性膠質(zhì)母細胞瘤中起著重要作用,基于表觀遺傳修飾的可逆性,尋找關(guān)鍵的表觀遺傳調(diào)控因子對進一步開發(fā)靶向治療策略顯得尤為重要。組蛋白賴氨酸甲基化和賴氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶的功能及作用機制已經(jīng)有了深入了解,但是與之相比,蛋白精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶PRMTs家族作為表觀遺傳因子在腫瘤中的作用還不清楚。本研究擬鑒定在膠質(zhì)母細胞瘤中起關(guān)鍵作用的PRMT,并系統(tǒng)研究其表觀遺傳調(diào)控機制。研究方法1、通過臨床樣本的大數(shù)據(jù)分析（TCGA,CGGA等）,明確蛋白精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶PRMTs與膠質(zhì)瘤惡性程度、與病人生存期相關(guān)性,同時結(jié)合臨床腫瘤樣本染色結(jié)果和細胞增殖實驗,進一步明確研究目的蛋白為PRMT2。2、利用細胞增殖實驗和限度稀釋實驗,明確PRMT2對膠質(zhì)母細胞瘤細胞增殖和維持腫瘤干細胞自我更新能力意義;同時構(gòu)建顱內(nèi)原位成瘤模型,利用Luciferase成像技術(shù)檢測敲低PRMT2對腫瘤的生長和荷瘤小鼠生存期的影響。3、利用RNA-seq分析,明確PRMT2降低導致表達下降的基因富集情況,并通過Western Blot和... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：128 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

根據(jù)TCGA數(shù)據(jù)庫分析蛋白精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶PRMTs家族各成員在不同惡性程度的神經(jīng)膠質(zhì)瘤中mRNA水平

10aplan-Meier 生長曲線表示根據(jù) TCGA 數(shù)據(jù)分析蛋白精氨酸甲基家族各成員 mRNA 水平和神經(jīng)膠質(zhì)瘤病人生存期的相關(guān)性。確蛋白精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶家族成員對膠質(zhì)母細胞瘤增殖的影響了解蛋白精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶家族成員對膠質(zhì)母細胞瘤增殖的影株不同背景的膠質(zhì)母細胞瘤細胞，分別為 U87（PTEN deleted） WT），U87 是 PTEN 基因缺失的細胞，而 T98G 包含野生型的兩株細胞中分別有效地敲低蛋白精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶家族各個成 細胞增值實驗驗證蛋白精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶是否對細胞增殖所必的增殖實驗結(jié)果 PRMT2 敲低對細胞增殖抑制均顯著，其他蛋酶成員敲低效果因細胞背景差不同差異較大（圖 1.3）。因此我T2 作為研究對象，探索其在膠質(zhì)母細胞瘤的發(fā)生或發(fā)展中的作

圖 1.3 表達相應短發(fā)卡 RNA 的兩株膠質(zhì)母細胞瘤細胞系的生長曲線。MTS 實驗中時間節(jié)點的選擇依照相應細胞的生長速度。誤差線 error bars 表示 SD，重復數(shù)n=3。Western Blot 實驗確定 PTEN 基因表達狀態(tài)。1.2.3 通過對膠質(zhì)母細胞瘤患者的生存分析和臨床組織染色結(jié)果明確研究對象PRMT2通過對膠質(zhì)母細胞瘤患者的生存分析發(fā)現(xiàn)，在所有我們分析的數(shù)據(jù)庫（TCGA，CGGA，REMBRANDT）（圖 1.4）里 PRMT2 的高表達與病人預后差均有明顯的正相關(guān)性。同時為了避免因為僅包含 mRNA 表達譜造成實驗結(jié)果的偏差，我們通過免疫組化的方法檢測原代神經(jīng)膠質(zhì)細胞瘤中 PRMT2 蛋白表達情況，原代臨床樣本包括神經(jīng)膠質(zhì)細胞瘤不同惡性程度共 21 例。正如圖 1.5 所展示，PRMT2 明顯富集在高惡性程度的神經(jīng)膠質(zhì)細胞瘤的細胞核中。我們根據(jù)細胞染色面積和染色強度，對每個臨床樣本進行打分評估，分析結(jié)果顯示 PRMT2陽性細胞率和腫瘤惡性程度呈現(xiàn)明顯的正相關(guān)（圖 1.6）。因此，我們得出結(jié)論PRMT2 高表達可以用來指示惡性神經(jīng)膠質(zhì)細胞的強侵略性。


本文編號：2962312