本文關(guān)鍵詞：耗竭NAD聯(lián)合2-DG增加腦膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞放射敏感性及其機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：本課題主要通過(guò)沉默膠質(zhì)瘤細(xì)胞NAMPT基因(NAD+應(yīng)急合成途徑限速酶)或者外源性加入NAD+影響細(xì)胞內(nèi)NAD+含量,探討2-脫氧葡萄糖(2-DG)誘導(dǎo)的NAD+含量增加,在維持細(xì)胞能量代謝、氧化還原水平以及存活的關(guān)鍵作用機(jī)制,為進(jìn)一步在2-DG處理下耗竭細(xì)胞內(nèi)NAD+誘導(dǎo)細(xì)胞死亡、放射增敏提供理論依據(jù)。方法：1.在2-DG誘導(dǎo)的U87細(xì)胞代謝適應(yīng)的研究中,Western blot法觀察不同濃度2-DG培養(yǎng)條件下,NAMPT的表達(dá)以及caspase3活化的改變,使用NAD+檢測(cè)試劑盒觀察NAD+含量變化,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)水平；2.在NAD+介導(dǎo)2-DG處理下的代謝適應(yīng)的研究中,小干擾RNA-NAMPT (siNAMPT)或外源性加入NAD預(yù)處理U87細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測(cè)DCFH染色的細(xì)胞內(nèi)ROS水平,NADPH試劑盒檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)NADPH水平；再聯(lián)合2-DG處理?xiàng)l件下,ATP試劑盒檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ATP含量變化,流式細(xì)胞儀檢測(cè)Annexin-V或PI染色后U87細(xì)胞凋亡變化,Westenn blot法觀察caspase 3活化情況；3.在耗竭NAD+聯(lián)合2-DG增加膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞殺傷研究中,使用小干擾RNA-NAMPT (siNAMPT)或雜亂RNA轉(zhuǎn)染U87細(xì)胞再聯(lián)合2-DG處理,流式細(xì)胞儀檢測(cè)Annexin-V-FITC以及PI雙染的細(xì)胞陰性水平。4.在耗竭NAD+聯(lián)合2-DG增加膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞放射敏感性研究中,實(shí)驗(yàn)分組為si-scramble RNA+IR、si-scramble RNA+2-DG+IR、siNAMPT+IR、siNAMPT+2-DG+IR,4Gy X射線照射,14天后,計(jì)數(shù)克隆形成水平；與克隆形成實(shí)驗(yàn)分組相同,激光共聚焦顯微鏡觀察γH2AX抗體孵育的U87細(xì)胞X線照射后0,4,10,24小時(shí)DNA雙鏈斷裂數(shù)目。結(jié)果：1.單純2-DG處理?xiàng)l件下,Western blot結(jié)果顯示U87細(xì)胞NAMPT蛋白表達(dá)升高,NAD+檢測(cè)結(jié)果顯示U87細(xì)胞內(nèi)NAD+含量增加,流式細(xì)胞儀檢測(cè)U87細(xì)胞DCFH熒光強(qiáng)度減弱,同時(shí)Western blot結(jié)果顯示2.5,5,10mM2-DG組相比對(duì)照組,caspase 3活化水平呈濃度依賴性下降；2.ATP試劑盒檢測(cè)結(jié)果顯示2-DG處理組比對(duì)照組ATP含量顯著下降,siNAMPT+2-DG處理組比2-DG處理組ATP含量顯著下降,2-DG+exNAD處理組比2-DG處理組ATP含量上升,證明2-DG誘導(dǎo)的NAD+增加參與維持細(xì)胞內(nèi)的ATP含量；流式細(xì)胞儀檢測(cè)U87細(xì)胞]DCFH熒光計(jì)數(shù),結(jié)果顯示2-DG、exNAD處理組與對(duì)照組相比,細(xì)胞內(nèi)ROS含量下降超過(guò)對(duì)照組的50%; FK866、siNAMPT處理組與對(duì)照組相比,細(xì)胞內(nèi)ROS含量上升超過(guò)對(duì)照組的25%,證明NAD+參與細(xì)胞內(nèi)ROS水平的調(diào)節(jié)；NADPH試劑盒檢測(cè)結(jié)果顯示2-DG、exNAD處理組與對(duì)照組相比,細(xì)胞內(nèi)NADPH含量顯著上升；FK866、siNAMPT處理組與對(duì)照組相比,細(xì)胞內(nèi)NADPH下降,證明2-DG誘導(dǎo)的NAD+增加通過(guò)NAD+-NADPH過(guò)程參與細(xì)胞內(nèi)ROS調(diào)控。Western blot結(jié)果顯示2-DG、NAD+處理組比對(duì)照組cleaved caspase 3表達(dá)降低,siNAMPT處理組比對(duì)照組cleaved caspase 3表達(dá)增加,siNAMPT+2-DG處理組比2-DG處理組cleaved caspase 3表達(dá)增加,siNAMPT+2-DG+exNAD處理組比siNAMPT+2-DG處理組降低caspase 3活化但仍然高于2-DG處理組,證明2-DG誘導(dǎo)的NAD+增加參與下調(diào)細(xì)胞內(nèi)凋亡過(guò)程；3.流式細(xì)胞儀檢測(cè)Annexin-V-FITC以及PI雙染的細(xì)胞陰性水平結(jié)果顯示siNAMPT+2-DG處理組對(duì)比si-scramble RNA+2-DG處理組在2-DG處理組細(xì)胞存活明顯下降,siNAMPT+2-DG+exNAD處理組比siNAMPT+2-DG處理組細(xì)胞存活上升但仍低于si-scramble RNA+2-DG處理組。4.克隆形成實(shí)驗(yàn)顯示siNAMPT+2-DG處理組的細(xì)胞比si-scramble RNA、siNAMPT、si-scramble RNA+2-DG組克隆形成顯著減少,siNAMPT+2-DG處理組放射增敏比為1.64,siNAMPT、si-scramble RNA+2-DG組放射增敏比為1.30,1.23,證明耗竭NAD+顯著增加膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞放射敏感性。激光共聚焦檢測(cè)γH2AX染色的DNA雙鏈斷裂結(jié)果為siNAMPT+2-DG組比si-scramble RNA、siNAMPT、si-scramble RNA+2-DG組在4小時(shí)、10小時(shí)時(shí)間點(diǎn)的DNA雙鏈斷裂的數(shù)目無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；在24小時(shí)時(shí)間點(diǎn),siNAMPT+2-DG組DNA雙鏈斷裂明顯增多,超過(guò)2-DG處理組的40%,si-scramble RNA組24小時(shí)的DNA雙鏈斷裂已經(jīng)基本消失,該結(jié)果提示siNAMPT+2-DG組有效影響電離輻射后DNA損傷修復(fù)進(jìn)程,增加U87細(xì)胞X線照射后的DNA損傷。結(jié)論：成功驗(yàn)證了NAD+-增加有利于維持U87細(xì)胞ATP穩(wěn)態(tài),降低細(xì)胞內(nèi)ROS以及抑制caspase 3的活化；進(jìn)一步研究表明抑制NAD+聯(lián)合2-DG能夠有效殺傷膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞,提高U87細(xì)胞的放射敏感性,該研究結(jié)果未見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。
【關(guān)鍵詞】：2-DG NAD~+ 代謝適應(yīng) 腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞 細(xì)胞殺傷 放射增敏
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.41;R730.55
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-12
• 第一部分：NAD~+對(duì)2-DG誘導(dǎo)代謝適應(yīng)的影響12-38
• 一、2-DG對(duì)膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞的能量代謝、氧化還原平衡以及凋亡的影響12-21
• 二、2-DG對(duì)膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞的NAD~+含量以及NAMPT基因表達(dá)影響21-25
• 三、2-DG處理下的NAD~+增加對(duì)膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞能量代謝、氧化還原平衡以及凋亡的影響25-38
• 第二部分：耗竭NAD~+對(duì)2-DG處理下的細(xì)胞存活以及放射敏感性的影響38-51
• 一、耗竭NAD~+對(duì)2-DG處理下的膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞存活的影響38-43
• 二、耗竭NAD~+對(duì)2-DG處理下的膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞放射敏感性的影響43-51
• 參考文獻(xiàn)51-57
• 綜述57-67
• 參考文獻(xiàn)62-67
• 英文縮略詞表67-68
• 攻讀學(xué)位期間本人公開(kāi)發(fā)表的論文及獲得專利68-70
• 致謝70-72

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 畢繼才;王洪海;謝建平;;微生物NAD合成酶及其抑制劑的研究進(jìn)展[J];微生物學(xué)報(bào);2011年03期

2 ;胃癌NAD假說(shuō)多了兩條證據(jù)[J];世界華人消化雜志;1999年10期

3 王國(guó)英,李瓊芳,徐希平;NAD(P)H:醌氧化還原酶1基因與2型糖尿病相關(guān)性研究[J];北京醫(yī)學(xué);2003年03期

4 陳鈞,白融,王琳,陳春蓮,田代石,劉念;NAD(P) H氧化酶在心衰犬心肌組織中的表達(dá)[J];中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志;2003年04期

5 張嬋娟;;NAD依賴性脫乙酰酶SIRT2參與程序性壞死[J];中國(guó)病理生理雜志;2013年10期

6 房盛夏;劉同濤;王莉莉;賈崇奇;;冠心病與NAD(P)H氧化酶p22phox基因C242T多態(tài)性[J];中國(guó)公共衛(wèi)生;2012年04期

7 龐靜,哈黛文;NAD(P)H氧化酶P~(22phox)亞單位基因啟動(dòng)子區(qū)多態(tài)性與高血壓病的關(guān)系[J];高血壓雜志;2004年06期

8 陳寧;傅毅;應(yīng)雅韻;倪培華;;NAD(P)H氧化酶p22phox亞基C242T基因多態(tài)性與腦梗死的關(guān)系[J];檢驗(yàn)醫(yī)學(xué);2011年03期

9 李立,石蓓,袁瑾,陶明,孫全林,肖祖碧,鄧宗琴;吞噬細(xì)胞NAD(P)H氧化酶p~(22Phox)mRNA表達(dá)與高血壓病氧化應(yīng)激的關(guān)系[J];遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2005年01期

10 李立,石蓓,袁瑾,余曉,張亞玲;高血壓病患者吞噬細(xì)胞NAD(P)H氧化酶P~(22Phox)mRNA的表達(dá)水平[J];高血壓雜志;2005年10期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 畢繼才;謝建平;;NAD合成酶一個(gè)重要的藥物靶標(biāo)[A];重慶微生物學(xué)會(huì)第九屆會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2009年

2 何志輝;沈允鋼;李振聲;米華玲;;不同基因型小麥及其單粒傳優(yōu)選后代光類囊體膜結(jié)合的NAD(P)H脫氫酶的活性及表達(dá)量的比較[A];紀(jì)念殷宏章先生百年誕辰暨全國(guó)光合作用學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2008年

3 米華玲;A.Takabayashi;T.Endo;T.Shikanai;;葉綠體NAD(P)H脫氫酶復(fù)合體在煙草對(duì)強(qiáng)光適應(yīng)過(guò)程中的作用機(jī)理研究[A];中國(guó)植物生理學(xué)會(huì)全國(guó)學(xué)術(shù)年會(huì)暨成立40周年慶祝大會(huì)學(xué)術(shù)論文摘要匯編[C];2003年

4 李宏亮;余葉蓉;張祥訊;;NAD(P)H氧化酶抑制劑對(duì)緩解油酸所致的內(nèi)皮細(xì)胞eNOS活性抑制作用的研究[A];2006年中華醫(yī)學(xué)會(huì)糖尿病分會(huì)第十次全國(guó)糖尿病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

5 胡向陽(yáng);方建穎;蔡偉明;湯章城;;質(zhì)膜NAD(P)H氧化酶參予金瓜炭疽(Colletotrichum lagerarium)細(xì)胞壁激發(fā)子誘導(dǎo)人參細(xì)胞產(chǎn)生激發(fā)反應(yīng)[A];中國(guó)植物生理學(xué)會(huì)全國(guó)學(xué)術(shù)年會(huì)暨成立40周年慶祝大會(huì)學(xué)術(shù)論文摘要匯編[C];2003年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 柴茂峰;擬南芥NAD（H）激酶在非生物脅迫中的功能分析[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

2 王鵬;葉綠體NAD（P）H脫氫酶的生理功能研究[D];中國(guó)科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）;2007年

3 徐曉麗;擬南芥線粒體中交替型NAD（P）H脫氫酶活性復(fù)合體的蛋白質(zhì)相互作用研究[D];蘭州大學(xué);2010年

4 段偉;低溫條件下葉綠體NAD（P）H脫氫酶復(fù)合體的生理功能及其對(duì)光質(zhì)的響應(yīng)[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

5 黃曉松;NAD（P）H氧化酶p47～（phox）基因SNP與腦卒中關(guān)系的研究[D];中南大學(xué);2006年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 顧成;耗竭NAD聯(lián)合2-DG增加腦膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞放射敏感性及其機(jī)制研究[D];蘇州大學(xué);2015年

2 蔣永華;220C協(xié)議中網(wǎng)絡(luò)接入延遲（NAD）算法研究[D];西安電子科技大學(xué);2007年

3 朱晨;酵母菌中輔酶NAD（P）H自發(fā)熒光振蕩的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

4 王麗輝;擬南芥NAD～+依賴的脫乙�；富虻墓δ躘D];浙江大學(xué);2006年

5 趙楊;紅麻細(xì)胞質(zhì)雄性不育相關(guān)基因nad的克隆與再生體系初探[D];廣西大學(xué);2011年

6 王琳;NAD與氫氧化鋁/鋅復(fù)合佐劑對(duì)HBsAg免疫效果的影響[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

  本文關(guān)鍵詞：耗竭NAD聯(lián)合2-DG增加腦膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞放射敏感性及其機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：290730