背景:細胞毒素(Lymphotoxin,LT)是一種主要表達于細胞表面的淋巴因子,亞型LTα與一到兩個與另一膜相關亞型LTβ結合形成LTα1β2或LTα2β1異源三聚體。其中,占主導地位的LTα1β2主要與表達于內皮細胞、成纖維細胞、上皮細胞、單核細胞和樹突狀細胞的淋巴毒素β受體(LTβR)相結合。過去對于LTβR信號通路的相關研究主要局限于淋巴組織器官的形成與發(fā)展。但是,對于其在神經(jīng)系統(tǒng)中,特別是神經(jīng)發(fā)生(neurogenesis)中的作用還是未知的。在本實驗中,我們將探究并揭示LTβR是否是調節(jié)信號通路對神經(jīng)干細胞神經(jīng)發(fā)生的分化的作用。方法:1.應用C57BL/6J野生型與GFAP-dnIκBα轉基因型小鼠,分別于胚胎期與成熟期小鼠大腦中分離出原代神經(jīng)干細胞成球培養(yǎng),首次傳代后行單層細胞培養(yǎng)、擴增及傳代。2.應用腺病毒調節(jié)的NFκB-螢火蟲熒光素酶報告基因試驗與p65/RelB/p52核轉位試驗實現(xiàn)NFκB的激活。3.運用實時定量聚合酶鏈式反應(quantitative RT-PCR)評估LTβR信使RNA的表達。4.運用免疫組織化學法與蛋白質印跡法評估LTβR蛋白的表達。5.使用熒光共焦顯微鏡觀察多標記免疫細胞化學法處理后的神經(jīng)干細胞分化情況并拍照記錄以備數(shù)據(jù)分析。6.應用Graphpad Prism軟件繪圖并數(shù)據(jù)分析。結果:在培養(yǎng)的神經(jīng)干細胞/神經(jīng)祖細胞中,經(jīng)LTα1β2作用后可同時激活NFκB經(jīng)典與非經(jīng)典信號通路。并且,在小鼠大腦中已確立的神經(jīng)源性區(qū)域內也被檢測到具有類似LTβR免疫活性的GFAP+/Sox2+神經(jīng)干細胞。同時,運用實時定量聚合酶鏈式反應與蛋白質印跡法也證實了LTβR分別表達于體外培養(yǎng)的神經(jīng)干細胞/神經(jīng)祖細胞與小鼠大腦神經(jīng)源性區(qū)域內。不難看出,LTβR的表達與神經(jīng)細胞的分化關系十分密切。在體外培養(yǎng)實驗中,經(jīng)LTα1β2作用的野生型神經(jīng)干/祖細胞會更傾向于向星形膠質細胞系和少突膠質細胞系分化,而抑制了其向神經(jīng)元分化。而對于GFAP-dn IκBα轉基因小鼠提取的神經(jīng)干/祖細胞,由于表達GFAP的神經(jīng)細胞,即星形膠質細胞,NFκB信號通路并不能被激活,其分化傾向也隨之有所不同。結論:本實驗第一次揭露了淋巴毒素β受體信號通路在神經(jīng)干/祖細胞的表達與功能。激活LTβR信號通路可以增強膠質細胞系的分化。同時,本實驗的實驗結果也證實了獲得性免疫反應與炎癥反應都具有調節(jié)神經(jīng)再生的功能。
【學位單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R741
【文章目錄】：
英漢縮略語名詞對照
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 淋巴毒素α1β2在神經(jīng)干/祖細胞中通過經(jīng)典和非經(jīng)典通路激活NFκB信號通路
    1 材料
    2 方法
    3 結果
第二部分 淋巴毒素β受體分別存在于體內和體外培養(yǎng)的神經(jīng)干細胞
    1 材料
    2 方法
    3 結果
第三部分 淋巴毒素α1β2抑制神經(jīng)干細胞向神經(jīng)元分化促進向膠質細胞分化
    1 材料
    2 方法
    3 結果
第四部分 膠質細胞NFκB被阻斷后的分化情況
    1 材料
    2 方法
    3 結果
討論
結論
    補充材料
參考文獻
文獻綜述
    參考文獻
致謝
攻讀碩士學位期間完成的論文

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本文編號：2867547