發(fā)布時間：2020-10-28 11:27

　　 背景神經網絡振蕩是一種節(jié)律性神經同步電活動,存在于海馬、杏仁核及大腦皮層等多個腦區(qū)。其中,海馬區(qū)gamma(γ,30~80Hz)節(jié)律與腦的高級認知功能如學習和記憶密切相關,是神經網絡振蕩的一種重要的表現形式。急性甲基苯丙胺(Methamphetamine,MA)暴露增加了γ節(jié)律,但其細胞內信號通道仍不清楚。目的探討急性MA應用對離體海馬腦片CA3區(qū)γ節(jié)律的影響及細胞機制。方法1.采用恒溫(28℃~32℃)界面灌流系統(tǒng)進行含有混合氣體(95%O_2+5%CO_2)和人工腦脊液(ACSF)進行灌流(流速:1.5 ml/min,pH值:7.35~7.45)。2.3-4周齡的雄性SD大鼠,給予水合氯醛(0.3-0.4mL/100g)腹腔注射麻醉后用預冷(0℃)的切片液心臟灌流,直至大鼠四肢均變?yōu)橥该靼咨?.快速取出所需腦組織,然后放入氧飽和的切片腦脊液中,采用LEICA VT1000S振動切片機水平切割腦組織,得到厚度為400μm的海馬腦片。4.將腦片轉移至記錄槽內,用含有混合氣體的ACSF(28℃~32℃,3-4ml/min)灌流約1h后,行場電位記錄。紅藻氨酸受體激動劑(Kainate,KA)用于誘導穩(wěn)定的γ節(jié)律(30~80 Hz)。5.觀察MA(20μM)對海馬CA3區(qū)γ節(jié)律的影響。之后,再使用多巴胺受體阻斷劑,NMDA受體阻斷劑,PI3K、Akt、ERK、PKA等細胞內激酶的抑制劑來探討急性MA應用對海馬神經網絡活動作用的細胞機制。記錄數據通過Spike 2軟件進行分析,統(tǒng)計結果以平均值±標準差的方式表示。使用Sigmastat軟件作統(tǒng)計分析,若P≤0.05,則認為具有統(tǒng)計學意義。結果1.MA對大鼠海馬CA3區(qū)γ節(jié)律的調節(jié)具有明顯增加作用。2.PI3K的抑制劑Wortmannin(0.2μM)不能阻斷MA對海馬γ節(jié)律增加作用。3.ERK阻斷劑U0126(2.5μM)、PKA阻斷劑H89不能阻斷MA對海馬γ節(jié)律增加作用。4.D1受體部分阻斷了MA對海馬γ節(jié)律的增加作用、D2受體完全阻斷了MA對海馬γ節(jié)律的增加作用、NMDA受體阻斷劑D-AP5則逆轉了MA對海馬γ節(jié)律的增加作用。5.Akt的抑制劑Tricribine(5μM)阻斷了MA對海馬γ節(jié)律的增強作用。結論MA對海馬CA3區(qū)γ節(jié)律具有明顯的增強作用;其增強機制與D2R、NMDA受體及Akt信號分子的激活相關。
【學位單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R741
【部分圖文】：

新鄉(xiāng)醫(yī)學院碩士學位論文2 結果2.1 MA 增強了 KA 誘導的γ節(jié)律使用 200nM KA 灌流離體海馬腦片，誘導出γ節(jié)律，達到穩(wěn)態(tài)后（50-120min），給予濃度為 20μM 的MA持續(xù)灌流約 30min，發(fā)現 MA增強了γ節(jié)律的能譜(圖1B)，當洗掉 MA 后，γ節(jié)律的能譜可以部分或者完全恢復(圖 1C)，統(tǒng)計學分析表明，MA 導致的增強具有顯著性意義(260.9±10.2% ，與對照組比較，***P<0.001，paired T-test，n=12)。上述結果表明了 MA 明顯增加了 KA 誘導的γ節(jié)律。

新鄉(xiāng)醫(yī)學院碩士學位論文阻斷劑）、Raclopride（DR2/3/4 阻斷劑）自身的γ節(jié)律的調節(jié)作用以及對 MA 作用的影響。應用含有濃度為 10μM SCH23390 的腦脊液灌流腦片，發(fā)現γ節(jié)律功率譜輕度增加(18.9±4.1%，*P<0.05，paired T-test，n=11，圖 2 A-C)，再加入 20μM MA后，γ節(jié)律的功率譜無明顯改變（8.4±4.4%，與 SCH23390 相比，P>0.05，pairedT-test ， n=11 ， 圖 2 A-C) 。 與 20μM MA 單 獨 作 用 (260.9±10.2%) 相 比 ，SCH23390+MA 對γ節(jié)律的作用（32.6±4.6%)具有顯著性差異(P<0.05，T-test) 這些結果表明：DR1 阻斷劑部分阻斷了 MA 的作用。

新鄉(xiāng)醫(yī)學院碩士學位論文2.3 D2/3/4 阻斷劑 Raclopride 對 MA 增強γ節(jié)作用的影響應用含有濃度為 10μM Raclopride 的腦脊液灌流腦片,對γ節(jié)律功率譜沒有明顯影響(103±8.6%,與對照組相比，P >0.05，paired T-test，n=6，圖 3A-C)。進一步加入20μM MA，γ節(jié)律的能譜顯示了輕度降低，但沒有顯著性差異(91.1±21%，與對照組相比，P >0.05， paired T-test，n=6，圖 3A-C)。這些結果表明：DR2 阻斷劑完全阻斷了 MA 的作用，說明 MA 對γ節(jié)律的增強作用主要涉及到 DR2 的激活。
【參考文獻】

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1 楊黎華;白潔;;單胺類神經遞質在藥物成癮中的作用機制[J];中國藥理學通報;2015年02期

本文編號：2860028