[目的]探討腦缺血及腦缺血再灌注過程中,腦血流量的動態(tài)變化。研究腦缺血及腦缺血再灌注腦脊液的蛋白組學。[方法]1.用線栓法建立腦缺血及腦缺血再灌注模型,將135只SD大鼠,隨機分為15組,每組9只。分別是sham組,缺血0.5h組,缺血2h組,缺血3h組,缺血4h組,缺血4.5h組,缺血6h組,缺血8h組,缺血0.5h再灌注2h組,缺血2h再灌注2h組,缺血3h再灌注2h組,缺血4h再灌注2h組,缺血4.5h再灌注2h組,缺血6h再灌注2h組,缺血8h再灌注2h組。2.本實驗采用激光散斑血流儀測量五個腦區(qū)的血流值并對模型進行行為學評價及TTC染色。3.抽取腦脊液做蛋白組學分析。4.結(jié)合質(zhì)譜結(jié)果,選取半暗帶及梗死核的腦皮質(zhì)進行Q-PCR實驗。[結(jié)果]1.腦血流值隨著缺血時間的延長逐漸降低,在4.5小時達到最低值,4.5h到8h腦血流量值有所回升。腦缺血4.5h后再灌注并不能使腦血流量增加。2.缺血2h組與缺血0.5h組相比梗死體積有明顯增加,差異在梗死體積方面具有顯著統(tǒng)計學意義(p0.01)。缺血6h組與缺血2h組相比梗死體積有明顯增加,差異在梗死體積方面具有顯著統(tǒng)計學意義(p0.01)。腦缺血2h組與腦缺血2h再灌注2h組相比,梗死體積有所增加,差異在梗死體積方面具有顯著統(tǒng)計學意義(p0.01)。0.5h組比sham組的Zea-Longa評分明顯升高,評分差異在神經(jīng)功能評價方面顯著統(tǒng)計學意義(p0.01)。缺血2h組與缺血0.5h組相比,其Zea-Longa評分有明顯增加,差異在神經(jīng)功能評價方面具有顯著統(tǒng)計學意義(p0.01)。缺血6h組與缺血2h組相比Zea-Longa評分明顯增加,差異在神經(jīng)功能評價方面具有顯著統(tǒng)計學意義(p0.01)。腦缺血2h組與腦缺血2h再灌注2h組比,Zea-Longa評分沒有明顯變化。3.相對于sham組,所有的缺血組的A0A0G2K0N6蛋白的表達均升高。Sham組腦脊液中存在而缺血組消失的蛋白經(jīng)過pcr驗證為:D3ZS41(細胞外基質(zhì)蛋白2,編碼基因為Ecm2)。在腦脊液中假手術(shù)組沒有而手術(shù)組有的蛋白經(jīng)過PCR驗證發(fā)現(xiàn)Q5M842,A2NB82,F1M5L5的變化與質(zhì)譜結(jié)果一致。腦缺血再灌注后腦脊液中含量升高的蛋白有P47942(編碼基因為:Dpysl2),Q6LE95(編碼基因為:Kng1),P09606(編碼基因為:Glul)。腦缺血再灌注后降低的蛋白經(jīng)過pcr驗證發(fā)現(xiàn)為:F1LM84(編碼基因為Nid1),F1LS40(編碼基因為Colla2),P02454(編碼基因為Colla1),M9NW49(編碼基因為Igf2),F1MAA7(編碼基因為Lamc1)的變化趨勢與質(zhì)譜結(jié)果一致。[結(jié)論]1.大鼠腦缺血再灌注的時間窗為4.5h之前,4.5h之后的再灌注可能會加重腦損傷。2.蛋白組學結(jié)果提示腦脊液中可能存在腦缺血早期的診斷標志物,例如:A0A0G2K0N6 蛋白、Ecm2 等。
【學位單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R743.3
【部分圖文】：

集數(shù)據(jù)等一系列操作。逡逑２．將大鼠固定在立體定位儀上，用剃毛器剔去大鼠頭頂絨毛，用手骨后緣正中縱切沿著矢狀縫剪開，暴露出顱骨，將其表面的骨膜和沾染理干凈，用生理鹽水潤濕。逡逑３．把顱骨放置水平，與射線垂直，激光射線定位在前顱和后顱的正整儀器檢測鏡頭與頭骨距離１５？２０邋ｃｍ，固定住射線后便不可移動位置。積為２５ｍｎｉＸ邋３４ｍｍ，手動或自動對焦至圖像清晰，監(jiān)測區(qū)域的散色光ＣＣＤ采集。逡逑４．對大鼠大腦五個區(qū)域進行腦血流量的監(jiān)測采集，分別為：１、缺血２、缺血中心區(qū)對側(cè)腦區(qū)，３、右側(cè)腦區(qū)，４、左側(cè)腦區(qū)，５：缺血區(qū)（如圖１分別監(jiān)測五個區(qū)域的血流值。逡逑

圖２邋Ｌａｂｅｌ－ｆｒｅｅ定量蛋白質(zhì)組學實驗流程圖逡逑２．８．２生物信息分析內(nèi)容逡逑在蛋白質(zhì)組學中，通過凝膠電泳、質(zhì)譜等技術(shù)產(chǎn)生的海量數(shù)據(jù)代表了生物體逡逑內(nèi)發(fā)生的全部過程及其變化。從這些龐大而復(fù)雜的實驗數(shù)據(jù)中尋找生物體的改變逡逑以及引起這些改變的源頭和機制，是蛋白質(zhì)組生物信息學的主要任務(wù)。逡逑在定量蛋白質(zhì)組學分析中，常用的生物信息學分析方法包括（但不局限于）：逡逑顯著性差異分析、ＧＯ注釋及富集分析、聚類分析。通常情況下，對目標蛋白集逡逑合的ＧＯ功能注釋的步驟和流程大致可以歸納如下：逡逑

差異蛋白熱圖

【參考文獻】

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1 吳珊珊;范宇威;高靜;穆衛(wèi)衛(wèi);張黎明;;S100B蛋白在神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的臨床意義及進展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2015年16期

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4 黃曉燕;徐娟;孫曉梅;代解杰;;樹

本文編號：2824944