【摘要】：目的:髓母細(xì)胞瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的惡性胚胎性腫瘤,但放射抗性的存在嚴(yán)重制約著放療效果。本研究旨在探索TOP2A對Daoy細(xì)胞增殖、遷移、侵襲及放射抗性的影響,并進(jìn)一步探索其發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制。方法:通過檢索GEO全基因組芯片數(shù)據(jù)庫分析得到在目標(biāo)基因,并利用Realtime-PCR檢測配對組織中的表達(dá)情況,應(yīng)用lipofectamine RNAiMAX reagent將siRNA轉(zhuǎn)染入細(xì)胞,Western blot及Realtime-PCR檢測轉(zhuǎn)染效率;CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞增殖能力的變化;細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞遷移能力變化;Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞侵襲能力變化;通過單機(jī)多靶模型處理克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果得到細(xì)胞擬合生存曲線,計算放射敏感性參數(shù)D_0、Dq、SF_2;最后Western blot檢測Wnt通路相關(guān)蛋白的表達(dá)。結(jié)果:1.通過檢索GEO數(shù)據(jù)庫得到GSE35493、GSE39182、GSE50161、GSE74195四個芯片組集,經(jīng)過差異分析選擇BRAD1、TOP2A以及TMSB15A三個目標(biāo)基因。2.CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:不論是接受6MV-X線照射的細(xì)胞(P(Blank vs si-TOP2A)0.001,P(NC vs si-TOP2A)0.001)還是未接受照射的細(xì)胞(P(Blank vs si-TOP2A)0.001,P(NC vs si-TOP2A)0.001),敲低TOP2A后細(xì)胞增長速度較對照組明顯降低。3.細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),敲低TOP2A后細(xì)胞傷口愈合率明顯低于對照組(非照射情況下,P(Blank vs si-TOP2A)=0.0071,P(NC vs si-TOP2A)=0.0328;照射情況下,(P(Blank vs si-TOP2A)=0.0028,P(NC vs si-TOP2A)=0.0021);Transwell遷移實(shí)驗(yàn)顯示:敲低TOP2A后細(xì)胞遷移率較對照組明顯降低(非照射情況下,P(Blank vs si-TOP2A)=0.0061,P(NC vs si-TOP2A)=0.0387;照射情況下,(P(Blank vs si-TOP2A)=0.0054,P(NC vs si-TOP2A)=0.0015)。3.Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)表明,敲低TOP2A后穿過基質(zhì)膠的細(xì)胞數(shù)量較對照組明顯降低(非照射情況下,P(Blank vs si-TOP2A)=0.0280,P(NC vs si-TOP2A)=0.0090;照射情況下,(P(Blank vs si-TOP2A)=0.0337,P(NC vs si-TOP2A)=0.0144)。4.平板克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)敲低TOP2A后細(xì)胞形成的克隆數(shù)量明顯低于對照組。5.Western blot結(jié)果發(fā)現(xiàn)敲低TOP2A后,β-catenin表達(dá)下降。結(jié)論:1.TOP2A低表達(dá)時,Daoy細(xì)胞的增殖、遷移以及侵襲能力明顯下降。2.TOP2A低表達(dá)時Daoy細(xì)胞放射抗性降低。3.TOP2A對于Daoy增殖、遷移、侵襲以及放射抗性的影響可能是通過Wnt信號通路實(shí)現(xiàn)的。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R739.4
【圖文】：

estren blot）實(shí)驗(yàn)檢測 TOP2A 蛋白的P2A 的細(xì)胞 TOP2A 表達(dá)顯著低于空 3 siRNA 敲低效率的驗(yàn)證l of TOP2A in Daoy cells transfectedgroup, ***P<0.001, **P<0.01, *P<0.0<0.001,###P<0.001,#P<0.05. The mR74 group was decreased significantlyABlank NC si-TOP2A

圖 10 TOP2A 和 β-catenin 蛋白的表達(dá)情況Fig.10 The expression of TOP2A and β-catenin討 論髓母細(xì)胞瘤起源于小腦顆粒細(xì)胞的高度惡性腫瘤，生長迅速、手術(shù)切除、易通過腦脊液播散。20 世紀(jì) 70 年代的研究發(fā)現(xiàn)即使術(shù)后聯(lián)合放療，患者 5 年無進(jìn)展生存也可達(dá)到 45%左右[9]。隨著對 MB 認(rèn)識的及相關(guān)臨床實(shí)驗(yàn)的開展，目前治療方案為依據(jù)不同危險分層進(jìn)行術(shù)后療，雖然全中樞神經(jīng)系統(tǒng)放射治療可帶來一系列近期及遠(yuǎn)期反應(yīng)——腫、顱內(nèi)壓升高、聽力喪失、甲狀腺功能減退、認(rèn)知功能減退等[10]，其在髓母細(xì)胞瘤治療中仍是至關(guān)重要的。放射抗性嚴(yán)重制約著患者的效果，因此研究其發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制至關(guān)具有重要意義。

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本文編號：2797221