【摘要】：背景:膠質(zhì)瘤(glioma)是成人神經(jīng)系統(tǒng)中最常見的惡性腫瘤。膠質(zhì)瘤按腫瘤的細胞形態(tài)分為星型細胞瘤、少枝突細胞瘤、室管膜瘤以及混合細胞瘤;按惡性程度分為I-IV級。膠質(zhì)瘤侵襲性強并且生長又極其迅速,且對化療藥物具有耐藥性,所以目前雖然臨床上手術(shù)后應(yīng)用放化療等治療,但效果仍不明顯�，F(xiàn)在從分子角度對膠質(zhì)瘤進行診斷和治療已經(jīng)越來越迫切。長鏈非編碼RNA(long non-coding RNAs,lncRNAs)是由超過200個核苷酸組成,由DNA轉(zhuǎn)錄非編碼蛋白質(zhì)。雖然人類基因組中存在著成千上萬的此類分子,只有很少一部分得以確定其生物作用。lncRNAs具有廣泛的生物學(xué)作用,包括影響細胞凋亡、侵襲,組蛋白的修飾等。ANRIL是一段位于INK4位點的反義非編碼RNA,其長度為3.8kb,是從位于9p21上反向轉(zhuǎn)錄INK4B-ARF-INK4A基因叢而來,主要定位于細胞核。該位置的突變與人類一些癌癥相關(guān),如神經(jīng)膠質(zhì)瘤、白血病、黑色素細胞瘤、基底細胞癌、鼻咽癌和乳腺癌等。miRNA是一類長約19-24個核糖核苷酸的非編碼小RNA分子,其與腫瘤的生長、侵襲、新血管生成和凋亡等密切相關(guān)。mi R-34a為其中之一,具有抑癌基因的作用。miR-34a可與靶基因Sirt1的3′UTR上的保守位點特異性結(jié)合抑制基因的表達。Sirt1是哺乳動物去乙酰化酶家族中的一員,具有細胞生存及轉(zhuǎn)錄沉默等作用。目的:目前ANRIL的潛在臨床意義還不明確,并且其與膠質(zhì)瘤的相關(guān)研究并不多。所以本實驗?zāi)康臑?探究ANRIL、miR-34a及Sirt1在膠質(zhì)瘤中的作用以及潛在關(guān)聯(lián),以及對膠質(zhì)瘤細胞增殖、侵襲、遷移及凋亡等的影響機制。方法:在本實驗中,我們使用膠質(zhì)瘤細胞系,膠質(zhì)瘤組織,正常腦組織以及膠質(zhì)瘤種植裸鼠作為實驗對象,主要應(yīng)用的實驗方法有:CCK-8法,細胞克隆實驗,流式細胞術(shù),Transwell小室侵襲實驗及westernblot,siRNA基因沉默,Real time-RT-PCR,細胞轉(zhuǎn)染及報告載體的構(gòu)建與熒光素酶報告基因檢測等技術(shù)。首先我們測定了在患者膠質(zhì)瘤細胞以及五種細胞系中ANRIL的表達。然后評估了抑制ANRIL后對miR-34a表達的影響,以及對膠質(zhì)瘤細胞U251的增殖、凋亡、侵襲、遷移的影響。最后探討了相關(guān)的信號通路機制。本論文的主要實驗結(jié)果如下:(1)ANRIL在膠質(zhì)瘤組織及膠質(zhì)瘤細胞中是上調(diào)的,對其進行敲除后可以抑制膠質(zhì)瘤的增殖、遷移、侵襲,并且促進凋亡。敲除ANRIL體內(nèi)實驗中顯著減小了裸鼠種植腫瘤的體積。(2)ANRIL對miR-34a具有分子海綿作用,抑制ANRIL后miR-34a明顯上調(diào),ANRIL抑制后對膠質(zhì)瘤細胞的其中一個作用機制是通過上調(diào)miR-34a進行的。(3)Sirt1是miR-34a的靶基因之一。miR-34a過表達可通過下調(diào)Sirt1,抑制細胞活性、遷移和侵襲能力,促進細胞凋亡。(4)Sirt1是通過PI3K/AKT/mTOR通路發(fā)揮作用。miR-34a過表達介導(dǎo)的下調(diào)Sirt1表達從而抑制了PI3K/AKT和m TOR通路,抑制了膠質(zhì)瘤的活性、遷移和侵襲能力,促進細胞凋亡。結(jié)論:綜上所述,ANRIL在膠質(zhì)瘤中上調(diào),我們的研究證實ANRIL抑制后抑制了膠質(zhì)瘤細胞的增殖、遷移及侵襲的其中一個機制是上調(diào)miR-34a介導(dǎo)的。而且,miR-34a過表達介導(dǎo)的下調(diào)Sirt1表達,隨后抑制PI3K/AKT和mTOR雙通路產(chǎn)生。因此本實驗研究揭示抑制ANRIL并且上調(diào)miR-34a可作為治療膠質(zhì)瘤的策略。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R739.4
【圖文】：

圖 1.1 lncRNA 對 miRNA 的作用[45]1.2.4 長鏈非編碼 RNA ANRIL 與腫瘤1.2.4.1 ANRIL 與肺癌研究發(fā)現(xiàn)，在非小細胞肺癌（NSCLC）組織中ANRIL表達上調(diào)，并且在預(yù)后不良的患者肺癌組織中表達增高更加明顯，ANRIL可以作為預(yù)后判斷的獨立診斷指標。敲除ANRIL后在體內(nèi)及體外實驗中NSCLC細胞增殖受到抑制，且促進腫瘤細胞凋亡[46]。本文也是通過閱讀此文獻時收到啟發(fā)，對ANRIL與膠質(zhì)瘤之間關(guān)系進行檢索。此項研究發(fā)現(xiàn)ANRIL的過表達不能抑制p15在PC9細胞的表達，可以抑制P21及KLF2的轉(zhuǎn)錄。有報道ANRIL具有NSCLC原癌基因的作用[47]。另一項研究發(fā)現(xiàn)在肺癌細胞中抑制磷脂酶D（PLD）后ANRIL表達明顯上調(diào)[48]。抑制PLD可以誘導(dǎo)肺癌細胞凋亡，抑制ANRIL

吉 林 大 學(xué) 博 士 學(xué) 位 論 文因 Ct 值-內(nèi)參基因 Ct 值，△△Ct=待測基因△Ct-照組樣本△Ct，然后數(shù)行分析，此數(shù)值表示待測樣本基因表達量相對于對照樣本基因表達量實驗中我們將膠質(zhì)瘤細胞與正常膠質(zhì)細胞相比，得到如下結(jié)果。實驗結(jié)量 RT-PCR 結(jié)果顯示 ANRIL 在膠質(zhì)瘤細胞中明顯比正常膠質(zhì)細胞表達87、U251、SHG-44 膠質(zhì)瘤細胞系中 ANRIL 表達較 BT325、A172 細胞

結(jié)果表明膠質(zhì)瘤組織中 ANRIL 表達較瘤旁組織（PT）表達明顯升高。（圖2.2）（P<0.01）。膠質(zhì)瘤Ⅰ級和Ⅱ級 ANRIL 表達差別不大，Ⅲ級和Ⅳ級 ANRIL 表達差別不大，但是Ⅲ/Ⅳ級明顯比Ⅰ/Ⅱ級 ANRIL 表達升高（圖 2.2）（P<0.01），Ⅲ

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Ya-Kai Huang;Jian-Chun Yu;;Circulating micro RNAs and long non-coding RNAs in gastric cancer diagnosis:An update and review[J];World Journal of Gastroenterology;2015年34期

本文編號：2778719