普朗克127修飾氧化石墨烯載鹽酸阿霉素抗人神經膠質瘤的體外實驗研究
發(fā)布時間:2017-03-30 18:07
本文關鍵詞:普朗克127修飾氧化石墨烯載鹽酸阿霉素抗人神經膠質瘤的體外實驗研究,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。
【摘要】:目的:檢測氧化石墨烯(Graphene oxide,GO)及普朗克127修飾的氧化石墨烯(Pluronic F127 modified graphene oxide,PF127-GO)對人星形膠質細胞、人神經膠質瘤細胞是否具有毒性作用。制備PF127-GO-DOX并研究其抗神經膠質瘤作用。為探索治療膠質瘤的新技術提供思路。方法:實驗主要分為分三部分:第一部分研究GO及PF127-GO的毒性作用,此部分應用人星形膠質細胞(AS)和人膠質瘤細胞(U251),采用CCK-8法檢測不同濃度的GO及PF127-GO對上述細胞的存活率的影響。實驗分組:(1)GO組:5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml;(2)PF127-GO組:5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml;(3)對照組。用不同濃度的GO、PF127-GO分別作用于AS細胞和U251細胞24h、48h、72h,CCK-8法檢測細胞存活率,分析GO及PF127-GO對AS細胞和U251細胞的毒性作用。確定納米材料的安全濃度范圍。本部分所用的星形膠質細胞為原代分離培養(yǎng)的人胎腦星形膠質細胞,用GFAP采用免疫熒光法進行鑒定。第二部分制備PF127-GO-DOX并對其進行檢測。應用紫外分光光度計檢測是否載藥成功,繪制DOX標準曲線,計算載藥量。此部分實驗還制備了FITC-PF127-GO和FITC-PF127-GO-DOX,應用熒光顯微鏡觀察納米粒子分布情況,觀察載藥體系是否進入細胞。第三部分研究了PF127-GO-DOX的抗人神經膠質瘤的作用,主要為體外實驗。此部分應用人神經膠質瘤U251細胞,采用CCK-8法檢測PF127-GO-DOX對U251細胞存活率的影響。此部分實驗首先測定了一系列不同濃度的PF127-GO-DOX和DOX對U251細胞的影響,比較兩者間的差異,選取合適的濃度進行下一步實驗。之后用不同濃度的PG、DOX、PF127-GO-DOX作用于U251細胞,倒置顯微鏡下觀察細胞變化,CCK-8法測定細胞存活率,分析并比較三者之間的關系,評價PF127-GO-DOX抗人神經膠質瘤作用。結果:(1)5μg/ml及以下的PF127-GO及GO對人星型膠質細胞無明顯的毒性作用。(2)50μg/ml及以下的PF127-GO及GO對U251細胞無明顯的毒性作用(3)成功制備PF127-GO-DOX,載藥量為0.83mg/mg,包封率為83%。(4)在DOX劑量相同的情況下,隨著PF127-GO-DOX、DOX濃度的增高,細胞存活率下降,兩組間無統(tǒng)計學差異。在實驗所用濃度范圍內,PF127-GO對U251細胞無明顯毒性作用。結論:(1)小濃度的GO及PF127-GO對AS及U251細胞無明顯毒性作用。(2)成功制備PF127-GO-DOX,載藥量為0.83mg/mg,包封率為83%。(3)PF127-GO-DOX對人膠質瘤細胞有較強的殺傷作用。
【關鍵詞】:氧化石墨烯 PF127 鹽酸阿霉素 載藥 膠質瘤
【學位授予單位】:吉林大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2016
【分類號】:R739.41
【目錄】:
- 中文摘要4-6
- Abstract6-11
- 中英文縮略詞對照表11-12
- 第1章 引言12-14
- 第2章 文獻綜述14-19
- 2.1 載藥14-16
- 2.2 熱療16-17
- 2.2.1 光熱療法16-17
- 2.2.2 熱療聯(lián)合化療17
- 2.3 GO免疫治療17
- 2.4 小結與展望17-19
- 第3章 GO及PF127-GO的毒性檢測19-29
- 3.1 材料19-20
- 3.1.1 主要儀器與設備19
- 3.1.2 主要試劑19-20
- 3.1.3 GO及PF127-GO20
- 3.1.4 細胞20
- 3.2 方法20-23
- 3.2.1 GO及PF127-GO對人星形膠質AS細胞的毒性研究20-22
- 3.2.2 GO及PF127-GO對人神經膠質瘤U251細胞的毒性研究22-23
- 3.2.2.1 U251細胞的復蘇、培養(yǎng)與凍存22
- 3.2.2.2 實驗分組22
- 3.2.2.3 CCK-8法檢測不同濃度GO及PF127-GO對U251的毒性22-23
- 3.2.3 統(tǒng)計學分析23
- 3.3 結果23-27
- 3.3.1 人星形膠質AS細胞鑒定23-24
- 3.3.2 不同濃度GO、PF127-GO作用AS細胞后細胞存活率24-26
- 3.3.3 不同濃度GO、PF127-GO作用U251細胞后細胞存活率26-27
- 3.3.4 不同濃度PF127-GO與GO作用U251細胞后細胞存活率比較27
- 3.4 討論27-28
- 3.5 結論28-29
- 第4章 PF127-GO-DOX的制備及檢測29-36
- 4.1 材料29-30
- 4.1.1 主要儀器與設備29-30
- 4.1.2 主要試劑30
- 4.2 方法30-31
- 4.2.1 PF127-GO-DOX的制備30
- 4.2.2 紫外-可見光分光光度計檢測載藥情況30-31
- 4.2.3 檢測PF127-GO-DOX是否進入人神經膠質瘤細胞31
- 4.3 結果31-34
- 4.3.1 紫外-可見光分光光度計檢測PF127-GO-DOX制備成功31-32
- 4.3.2 PF127-GO-DOX載藥量測定32-33
- 4.3.3 熒光顯微鏡檢測PF127-GO-DOX分布情況33-34
- 4.4 討論34-35
- 4.5 結論35-36
- 第5章 PF127-GO-DOX抗人膠質瘤U251的體外實驗研究36-43
- 5.1 材料36-37
- 5.1.1 主要儀器與設備36
- 5.1.2 主要試劑36-37
- 5.2 方法37-38
- 5.2.1 CCK-8 法檢測細胞存活率37
- 5.2.2 細胞形態(tài)學37-38
- 5.2.3 統(tǒng)計學分析38
- 5.3 結果38-41
- 5.3.1 DOX和PF127-GO-DOX作用于U251細胞比較38
- 5.3.2 PF127-GO-DOX、DOX、PF127-GO作用于人神經膠質瘤細胞U251后細胞存活率38-40
- 5.3.3 細胞形態(tài)學變化40-41
- 5.4 討論41-42
- 5.5 結論42-43
- 第6章 結論43-44
- 參考文獻44-50
- 作者簡介及在學期間所取得的科研成果50-52
- 致謝52
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本文編號:277733
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