【摘要】：目的:本文通過(guò)體內(nèi)纖溶酶濃度的動(dòng)態(tài)變化,設(shè)計(jì)制備了載NGF的纖溶酶敏感微球,并以神經(jīng)導(dǎo)管為支架,構(gòu)建良好的外周神經(jīng)修復(fù)環(huán)境,為周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)的修復(fù)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:通過(guò)取代反應(yīng)將纖溶酶敏感多肽和ACRL-PEG-NHS合成纖溶酶敏感多肽水凝膠單體材料,MALDI-TOF檢測(cè)結(jié)果;通過(guò)酰氯酯化法合成對(duì)照的PE.GDA水凝膠單體材料,經(jīng)l+核磁共振譜(1H-NMR)分析其結(jié)構(gòu)及酯化率;分別測(cè)量NGF在兩相中的分配系數(shù)(水凝膠材料相/葡聚糖相);通過(guò)雙水相乳化法制備兩種不同的水凝膠微球并對(duì)其進(jìn)行形態(tài)學(xué)及體外表征;W/O/W法制備PLGA緩釋微球并與水凝膠微球作對(duì)照;三種微球都進(jìn)行體外釋放實(shí)驗(yàn);將PC12細(xì)胞與微球NGF釋放液共培養(yǎng),根據(jù)PC12細(xì)胞長(zhǎng)出軸突的分化率來(lái)評(píng)價(jià)NGF的生物活性;溶劑揮發(fā)法制備PLA神經(jīng)導(dǎo)管;建立大鼠坐骨神經(jīng)模型,用微球復(fù)合入導(dǎo)管橋接坐骨神經(jīng)斷端,觀察坐骨神經(jīng)恢復(fù)情況。結(jié)果:合成的纖溶酶敏感多肽水凝膠單體分子量主要集中在8194,產(chǎn)率高達(dá)94.82%;PEGDA經(jīng)l+核磁共振譜(1H-NMR)分析,平均產(chǎn)率為(76.02±1.22)%,平均酯化率為(77.05±3.44)%;纖溶酶敏感水凝膠材料的兩相分配系數(shù)為28.7%,PEGDA水凝膠材料的兩相分配系數(shù)為30.7%;采用雙水相乳化法制備的兩種水凝膠微球外形圓整,其中纖溶酶敏感微球的平均粒徑為38.9±16.7μm,微球包封率和載藥量分別為25.73%和0.0029%;PEGDA水凝膠微球,平均粒徑為32.5±18.6μm,包封率為19.21%,載藥量為0.0028%;PLGA緩釋微球的平均粒徑為14.9±16.1μm,微球的包封率為86.23%,載藥量為0.012%,體外釋放曲線符合Higuchi方程(Q=0.0228t1/2+0.0138,R2=0.9984);纖溶酶水凝膠微球體外釋放實(shí)驗(yàn)顯示在1d內(nèi)累計(jì)釋放率為55.90%,存在一定的突釋效應(yīng),在第五天累計(jì)釋放率達(dá) 88.20%,緩釋曲線符合 Higuchi 方程,Q=0.0926t1/2-0.0629,R2=0.9914;在纖溶酶酶敏感微球4h的NGF的釋放液中,PC12細(xì)胞的分化率為74.21%,在7d時(shí)分化率為45.68%,而PC12細(xì)胞的分化率在PLGA微球3h的NGF釋放液中為71.25%,在7d時(shí)分化率為29.35%。PLA神經(jīng)導(dǎo)管拉伸強(qiáng)度為2.08±0.36MPa,拉伸伸長(zhǎng)率為(257.6±53.22)%。術(shù)后一個(gè)月,體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)各組導(dǎo)管內(nèi)坐骨神經(jīng)發(fā)生不同程度的再生,均未完全吻合,導(dǎo)管中間有部分細(xì)胞組織的遷移,神經(jīng)再生已經(jīng)啟動(dòng)。結(jié)論:本文通過(guò)酰氯酯化法合成的PEGDA水凝膠單體材料酯化率較高,并合成了純度較高的纖溶酶敏感水凝膠單體材料,兩種材料所形成的水凝膠都有較好的溶脹性;制備的ACRL-PEG-peptide-PEG-ACRL纖溶酶敏感微球和PEGDA水凝膠微球都有較好的緩釋性能,相比于PEGDA水凝膠微球,前者具有較好的纖溶酶敏感性,能根據(jù)纖溶酶的濃度而控制釋藥量;雙水相乳化法制備的載NGF的微球比采用W/O/W乳化溶劑揮發(fā)法制備的微球更易保持NGF的活性。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R318.08;R745
【圖文】：

圖１－２邋ＰＥＧＤＡ的１Ｈ邋ＮＭＲ核磁共振譜圖（化學(xué)位移：５．９－６．４邋ｐｐｍ）逡逑Ｆｉｇ．邋１邋－２邐＾邋ＮＭＲ邋ｓｐｅｃｔｒａ邋ｏｆ邋ＰＥＧＤＡ逡逑１３逡逑

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－－．３０ｓ，待完全溶解后，分別向其中放入內(nèi)徑１ｍｍ的毛細(xì)管，再向其中加入ｌＰＳ邋溶液（５０ｍｇ／ｍｌ）和邋５００邋的邋ＴＥＭＥＤ邋溶液（２０％，ｐＨ７．４），交聯(lián)反將毛細(xì)管取出，置于丙酮中浸泡潤(rùn)濕２天后，取出毛細(xì)管中的凝膠柱。逡逑水凝膠溶脹率的測(cè)定逡逑將制備的兩種水凝膠常溫干燥１天，稱重，并測(cè)量干凝膠柱的長(zhǎng)度和質(zhì)量ｍ、長(zhǎng)度１、直徑ｄ。將干燥的凝膠柱置于３ｍｌ的ＰＢＳ緩沖液中，出，迅速用濾紙吸取外部水分，稱重，記為Ｍ，測(cè)量長(zhǎng)度Ｌ、直徑Ｄ。率和體積溶脹率的公式：逡逑質(zhì)量溶脹率＝（Ｍ—ｍ）／ｍｘｌ0０％逡逑體積膨脹率＝（ＬＤ２－ｌｄ２）／ｌｄ２ｘ邋１００％逡逑結(jié)果逡逑

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2761834