【摘要】：目的:目前的研究顯示,Epsin 3(EPN3)表達主要局限于胃壁細(xì)胞、受傷或病變的組織中,而正常的腦組織中不表達EPN3。EPN3已被確定作為癌基因參與雌激素受體陽性的乳腺癌和非小細(xì)胞肺癌中,但對其在癌癥中具體的功能知之甚少。本研究目的是探討EPN3在膠質(zhì)瘤組織中的表達與臨床病理特征的關(guān)系,以及初步探討EPN3在膠質(zhì)瘤細(xì)胞惡性行為中的作用及分子機制。方法:從臨床上選取167例不同級別的人膠質(zhì)瘤組織,按照WHO分級,I級+II級為低級別膠質(zhì)瘤,III級+IV級為高級別膠質(zhì)瘤。采用免疫組化的檢測方法,檢測167例不同級別的人膠質(zhì)瘤組織中EPN3蛋白的表達量。再采用細(xì)胞體外培養(yǎng)的方法,選取U87和U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞系,通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染來敲低和過表達EPN3,進而研究EPN3對膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生物學(xué)作用,并采用實時定量PCR和Western blotting實驗來驗證各分子的表達情況。Transwell遷移和侵襲實驗來研究EPN3對膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移和侵襲作用。結(jié)果:免疫組化結(jié)果顯示,96例低級別膠質(zhì)瘤組織(WHO分級I+II)中,有17例(17.7%)EPN3蛋白表達呈陽性;在71例高級別膠質(zhì)瘤組織中(WHOⅢ+Ⅳ),有37例(52.1%)EPN3蛋白水平表達呈陽性。在低級別膠質(zhì)瘤組和高級別膠質(zhì)瘤組之間,EPN3陽性表達結(jié)果之間有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異(P0.001)。但患者的年齡、性別和腫瘤大小與EPN3之間無顯著差異性(P0.05)。在膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中過表達EPN3激活了轉(zhuǎn)錄因子Slug和Twist,并通過誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞上皮 間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)過程促進細(xì)胞遷移和侵襲。同時,過表達EPN3增加了NICD1,β-catenin的表達水平。結(jié)論:EPN3在膠質(zhì)瘤中發(fā)揮腫瘤促進子的作用,并且通過激活轉(zhuǎn)錄因子Slug和Twist而非Snail 1來誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞EMT過程,從而促進膠質(zhì)瘤細(xì)胞發(fā)生遷移和侵襲。EPN3誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞發(fā)生EMT過程可能與Notch1和β-catenin信號通路有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R739.4
【圖文】：

對這 167 例膠質(zhì)瘤組織進行分析，如圖 1-1 所示，圖（A）最左側(cè)為結(jié)腸癌組織陽性對照，中間的為膠質(zhì)瘤組織 EPN3 陽性結(jié)果，右側(cè)的為膠質(zhì)瘤組織 EPN3 陰性結(jié)果。結(jié)果顯示，96 例低級別膠質(zhì)瘤組織中，有 17 例 EPN3 表達為陽性（17.7%）；71 例高級別膠質(zhì)瘤組織中，有 37 例 EPN3 表達結(jié)果為陽性（52.1%）（表 1）（圖 1）。低級別膠質(zhì)瘤組織和高級別膠質(zhì)瘤組織中 EPN3 陽性率相比，EPN3 在兩組之間的表達水平有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001，表 1）。在 167 例膠質(zhì)瘤樣本中， 小于 45 歲的患者有 90 例，其中 EPN3 表達陽性者有 28 例（31.1%）， 年齡大于等于 45 歲的患者有 77 例，EPN3 表達陽性者有 26 例（33.8%），兩者之間沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05，表 1)。腫瘤組織小于 4.5cm 的121 例患者中，EPN3 陽性者有 39 例（32.2%），腫瘤組織大于等于 4.5cm 的 46例患者中，EPN3 陽性者占 15 例（32.6%），兩組之間也沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05，表 1）。A

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 Epsin3通過誘導(dǎo)EMT過程促進膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移和侵襲1.2.3 EPN3 在膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中的表達水平接著，我們采用 Western blotting 的方法對 6 個膠質(zhì)瘤細(xì)胞系（A172，SNB19，LN229，U251，LN308 和 U87）進行 EPN3 蛋白表達的測定。如圖 1-1 (B)，在不同的膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中，EPN3 的表達水平各不相同。其中 U251 膠質(zhì)瘤細(xì)胞中EPN3 表達水平最高，A172 膠質(zhì)瘤細(xì)胞中表達水平最低。B

圖 1-1 （C）通過脂質(zhì)體將質(zhì)粒 sh-EPN3-4 和 pCMV6-EPN3 轉(zhuǎn)染到 U87 和U251 膠質(zhì)瘤細(xì)胞中，分別用來敲低和過表達 EPN3 水平，scrambled 和empty 分別作為陰性對照。Western blotting 以及實時定量 PCR 等方法分別用來檢測 EPN3 mRNA 的表達水平以及蛋白表達情況。* P＜0.05，P**＜0.01，P***＜0.001。所有實驗重復(fù)至少三次。 過表達 EPN3 促進 U87 和 U251 膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲和遷移免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，EPN3 在高級別膠質(zhì)瘤組織中表達明顯增高，由們推測，是否 EPN3 促進膠質(zhì)瘤組織惡性生物學(xué)行為的發(fā)生？為了進一步EPN3 在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中發(fā)揮的作用，我們采用了 Transwell 小室（上室未鋪方法來檢測 EPN3 對膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移的影響，Transwell 小室（上室鋪膠）來檢測 EPN3 對膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲能力的影響。結(jié)果如圖 2 所示，與對照組比，下調(diào) EPN3 的表達顯著抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞株 U87 和 U251 細(xì)胞的遷移和力（P＜0.01，圖 2A），而上調(diào) EPN3 則明顯促進膠質(zhì)瘤細(xì)胞株 U87 和 U251

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