本文關(guān)鍵詞：星形膠質(zhì)細(xì)胞Cx43及其半通道在腦缺血再灌注損傷中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景缺血性腦血管疾病是臨床神經(jīng)內(nèi)科的常見(jiàn)疾病,其治療發(fā)展過(guò)程中的缺血再灌注損傷(ischemia reperfusion injury, IRI)被認(rèn)為是比疾病本身更具有破壞性,通常是決定預(yù)后的關(guān)鍵因素。腦神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的凋亡是腦缺血再灌注損傷的重要病理表現(xiàn),目前關(guān)于前者的研究較多,而后者的研究很少。星形膠質(zhì)細(xì)胞在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中體積最大,在哺乳動(dòng)物腦內(nèi)分布最廣泛,同時(shí)它比腦內(nèi)其他細(xì)胞具有更廣泛的縫隙連接(Gap junctions, GJs)�？p隙連接是相鄰細(xì)胞間細(xì)胞膜上傳遞信息的物質(zhì)管道,由兩個(gè)半通道(Hemichannel, HC)構(gòu)成�？p隙連接蛋白是構(gòu)成該通道的蛋白,其含量最多、分布最廣泛的是連接蛋白43(Connexin43, Cx43),目前被證實(shí)跟各種顱腦損傷以及細(xì)胞凋亡信號(hào)傳導(dǎo)密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)使用缺血再灌注損傷體外模型(細(xì)胞氧葡萄糖剝奪-再恢復(fù)模型),通過(guò)對(duì)Cx43、半通道抗體1(HC1)和細(xì)胞凋亡標(biāo)志物—半胱天冬蛋白酶3(Caspase3, Casp3)表達(dá)的檢測(cè),從細(xì)胞水平探討星形膠質(zhì)細(xì)胞Cx43及其半通道與細(xì)胞凋亡的關(guān)系以及在腦缺血再灌注損傷中二者可能起的作用。目的通過(guò)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行氧葡萄糖剝奪-再恢復(fù)(oxygen-glucose deprivation reoxygenation, OGDR)處理,研究Cx43及其半通道對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞活性的影響以及與星形膠質(zhì)細(xì)胞凋亡的關(guān)系,探討Cx43及其半通道可能在缺血再灌注損傷中的作用,從而為缺血性腦血管疾病的治療和預(yù)后提供新的理論基礎(chǔ)和治療指南。方法人類(lèi)大腦星形膠質(zhì)細(xì)胞株通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng),使用免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物,glial fibrillary acidic protein,GFAP)、Cx43及HCl以鑒定其表達(dá)。細(xì)胞經(jīng)常規(guī)培養(yǎng)、空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染和特異性Cx43-shRNA轉(zhuǎn)染后分為三組,分別為cell line組(正常細(xì)胞株)、Psup組(空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染)和shRNA組(特異性Cx43-shRNA轉(zhuǎn)染),通過(guò)免疫印跡法對(duì)每組Cx43和HC1的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。每組細(xì)胞分別給予OGDR處理,各組內(nèi)未處理細(xì)胞作為對(duì)照組。在不同的氧葡萄糖再恢復(fù)時(shí)間Ohour、4hours和24hours (Oh、4h、24h),用MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞活性,通過(guò)免疫印跡法檢測(cè)各組Cx43,HCl和Casp3的表達(dá)。結(jié)果1.本實(shí)驗(yàn)使用的細(xì)胞可見(jiàn)Cx43+GFAP和HCl+GFAP的表達(dá),鑒定結(jié)果為星形膠質(zhì)細(xì)胞,且細(xì)胞膜存在Cx43及其半通道的表達(dá)。2. Cell line組和Psup組細(xì)胞中都有Cx43和HC1的表達(dá),但在shRNA組中沒(méi)有Cx43和HC1的表達(dá),轉(zhuǎn)染成功。3. OGDR后cell line組和Psup組星形膠質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞活性在氧葡萄糖再恢復(fù)4h明顯下降,與對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05),而在氧葡萄糖恢復(fù)0h和24h的細(xì)胞活性與對(duì)照組差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05)；shRNA組星形膠質(zhì)細(xì)胞在氧葡萄糖再恢復(fù)0h、4h和24h的細(xì)胞活性與對(duì)照組差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05)。4. OGDR后cell line組和Psup組星形膠質(zhì)細(xì)胞中Cx43、HC1和Casp3的表達(dá)在氧葡萄糖再恢復(fù)4h明顯升高,與對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05),而在氧葡萄糖恢復(fù)0h和24h的表達(dá)與對(duì)照組差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05)；shRNA組星形膠質(zhì)細(xì)胞中Cx43、HC1和Casp3在氧葡萄糖再恢復(fù)0h、4h和24h的表達(dá)與對(duì)照組差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均胗0.05)結(jié)論1.腦缺血再灌注損傷早期星形膠質(zhì)細(xì)胞存活力降低,Cx43及其半通道可能起促進(jìn)作用。2.腦缺血再灌注損傷早期星形膠質(zhì)細(xì)胞凋亡增多,Cx43及其半通道可能促進(jìn)了細(xì)胞凋亡進(jìn)程,進(jìn)而在預(yù)測(cè)早期腦缺血再灌注損傷方面起關(guān)鍵作用。3.雖然本研究中特異性Cx43-shRNA轉(zhuǎn)染是作為一種分析工具,但臨床中可能為改善缺血再灌注損傷后的腦細(xì)胞活性,減少細(xì)胞凋亡提供一個(gè)有前景的治療手段。
【關(guān)鍵詞】：縫隙連接蛋白43 半通道 星形膠質(zhì)細(xì)胞 缺血再灌注損傷 氧葡萄糖剝奪-再恢復(fù)
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R743
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 符號(hào)說(shuō)明12-13
• 前言13-17
• 材料與方法17-27
• 結(jié)果27-31
• 討論31-39
• 結(jié)論39-40
• 附表40-42
• 參考文獻(xiàn)42-49
• 致謝49-50
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文50-51
• 附件51

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  本文關(guān)鍵詞：星形膠質(zhì)細(xì)胞Cx43及其半通道在腦缺血再灌注損傷中的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：274512