【摘要】：目的探究載脂蛋白E(ApoE)對髓鞘抗原誘導免疫后的的小鼠脾臟淋巴細胞腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白介素-17(IL-17)以及基質金屬蛋白酶-9(MMP-9)、基質金屬蛋白酶組織抑制劑-1(TIMP-1)表達的影響。方法用0.01mol/L的PBS緩沖溶液將少突膠質細胞糖蛋白(MOG35-55)稀釋至2mg/ml,與等量的含4mg/ml熱滅活結核菌素(H37Ra)的完全弗氏佐劑充分混勻,在冰上使用全玻璃注射器抽打制備成油包水乳劑抗原。在同源的ApoE基因缺失型(ApoE-/-)和野生型(WT)型的C57BL/6J成年期雌性小鼠背部皮下多點注射已制備的MOG35-55乳劑抗原(0.2ml/只)。免疫當天、免疫后48h給每只小鼠腹腔各注射一次百日咳毒素(200ng/次/只)。免疫誘導后第7d取小鼠脾臟,分離提取小鼠脾臟淋巴細胞并進行體外培養(yǎng),隨機將兩種小鼠中提取的淋巴細胞分為四組,即ApoE-/-實驗組(E-ApoE-/-)、WT實驗組(E-WT)、ApoE-/-對照組(C-ApoE-/-)、WT對照組(C-WT)。用25μg/ml的MOG35-55刺激兩實驗組(E-ApoE-/-組和E-WT組)的淋巴細胞,兩對照組淋巴細胞(C-ApoE-/-組和C-WT組)給予等量生理鹽水進行處理,24小時后,分別離心并收集各組淋巴細胞培養(yǎng)上清液。采用酶聯免疫吸吸附實驗(ELISA)測定各組細胞分泌腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素-17(IL-17)、基質金屬蛋白酶-9(MMP-9)、基質金屬蛋白酶組織抑制劑-1(TIMP-1)的濃度變化情況并進行統(tǒng)計學分析。結果(1)ApoE-/-小鼠和WT小鼠被髓鞘抗原免疫誘導后,其脾臟淋巴細胞(C-Apo E-/-組和C-WT組)均能分泌TNF-α、IL-17、MMP-9,ApoE-/-小鼠(C-ApoE-/-組)相對于WT小鼠(C-WT組)脾臟淋巴細胞TNF-α、IL-17、MMP-9分泌的量增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);(2)體外用髓鞘抗原MOG35-55單獨刺激兩種小鼠脾臟淋巴細胞后,兩實驗組(E-ApoE-/-組和E-WT組)淋巴細胞TNF-α、IL-17、MMP-9的濃度相對于兩對照組(CApoE-/-組和C-WT)明顯升高,且E-ApoE-/-組較E-WT組濃度升高更明顯,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);(3)免疫誘導和體外用MOG35-55刺激各組小鼠脾臟淋巴細胞后,均能表達TIMP-1,但各組小鼠脾臟淋巴細胞TIMP-1的濃度未見明顯差別,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論髓鞘抗原刺激小鼠脾臟淋巴細胞可以使其表達炎癥因子TNF-α、IL-17和基質金屬蛋白酶-9(MMP-9)、基質金屬蛋白酶抑制劑-1(TIMP-1);ApoE缺乏可以使脾臟淋巴細胞分泌的炎癥因子TNF-α、IL-17和基質金屬蛋白酶-9(MMP-9)明顯增加,進而可能影響血腦屏障的完整性,但ApoE缺乏對小鼠脾臟淋巴細胞TIMP-1表達的量無明顯影響。ApoE、炎癥因子、基質金屬蛋白酶-9三者之間的關系可以作為對諸如多發(fā)性硬化等免疫介導的炎性脫髓鞘疾病中血腦屏障損傷機制研究及其治療策略研究的切入點。
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R744.51
【圖文】：

2015 級碩士研究生學位論文 載脂蛋白 E 對小鼠脾臟淋巴細胞 TNF-α、IL-17、MMP-9、TIMP-1 表達的結果1. 各組脾臟淋巴細胞 TNF-α、IL-17 表達情況比較見圖 1（A、B），C-ApoE-/-組淋巴細胞 TNF-α、IL-17 的濃度較 C-W的濃度升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）； E-ApoE-/-組和 E-WT 組淋細胞 TNF-α、IL-17 濃度分別與對照組相比，其濃度均明顯升高，差異有計學意義（P＜0.05）；與 E-WT 組相比，E-ApoE-/-組 TNF-α、IL-17 的濃明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

臟淋巴細胞培養(yǎng)液 MMP-9 濃度的比較omparison of MMP-9 concentrations in spleen lymphocyte cultur脾臟淋巴細胞 TIMP-1 表達情況比較，對四組測定結果進行兩兩比較，各組小鼠脾臟淋巴細見明顯差異，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

【參考文獻】

相關期刊論文 前4條

1 鄭明華;唐玉蘭;韋俊杰;梁培霄;陶敏;韋云飛;;載脂蛋白E擬肽對實驗性自身免疫性腦脊髓炎小鼠腦脊髓CD4~+、CD8~+ T淋巴細胞表達的影響[J];臨床神經病學雜志;2013年03期

2 楊帆;楾光濤;李濤;;多發(fā)性硬化相關T細胞免疫機制的研究進展[J];免疫學雜志;2013年05期

3 韋俊杰;鄭明華;梁培霄;陶敏;唐玉蘭;;載脂蛋白E擬肽對EAE小鼠的髓鞘和軸突損傷的影響[J];中風與神經疾病雜志;2012年10期

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本文編號：2732054