【摘要】：目的:檢測和明確腫瘤-睪丸相關抗原ACRBP ORF的選擇性剪接區(qū)mRNA的存在,檢測此剪接異構體在不同類型的惡性腦腫瘤組織中的表達情況,探討ACRBP的剪接異構體的表達與惡性腦腫瘤類型、ACRBP基因的相關性。方法:(1)臨床腫瘤標本收集:2013年-2018年住院并手術的腦腫瘤患者膠質瘤63例(星形細胞瘤33例,膠質母細胞瘤30例),髓母細胞瘤29例。(2)細胞培養(yǎng):選擇實驗室穩(wěn)定傳代的細胞株SHG-44(人膠質瘤細胞)、Hep G2(肝癌細胞)、SMMC7721(人肝癌細胞)進行細胞培養(yǎng)。(3)通過選擇性剪接相關數(shù)據(jù)庫(Alternative Splicing Database,ASD)對ACRBP基因可能存在的選擇性剪接異構體進行預測。針對預測結果,使用Primer Premier 5.0和Oligo 6.0軟件設計目標選擇性剪接異構體的PCR引物,使用RT-PCR技術檢測預測剪接異構體在腦腫瘤樣本和細胞株中的表達情況。對表達結果陽性的細胞株樣本的PCR擴增產物送公司測序。應用計算機軟件對測序結果進行序列的比對分析,經過驗證從細胞株樣本中提取的mRNA序列與生物信息學預測的序列一致,確定為新的剪接異構體后,對表達結果陽性的腦腫瘤樣本采用實時定量PCR反應,檢測目標剪接異構體在腦腫瘤組織中的表達情況,分析ACRBP的剪接異構體與臨床參數(shù)的相關性。結果:(1)TA克隆測序證實了RT-PCR擴增產物為目的基因;(2)成功設計了ACRBP-V5a的特異性引物;(3)從預測的選擇性剪接異構體中篩選并證實了一種新型的人類ACRBP基因的剪接異構體——V5a的存在;(4)Hep G2(肝癌細胞),SMMC7721(人肝癌細胞)表達ACRBP-V5a剪接異構體;(5)不同類型的腦腫瘤組織中,該剪接異構體表達陽性率,結果如下:星形細胞瘤30.3%(10/33),膠質母細胞瘤33.3%(10/30),髓母細胞瘤48.3%(14/29),總陽性率37.0%(34/92);在不同類型的腦腫瘤組織中,ACRBP-V5a的表達情況不存在差異(P0.05);(6)在不同性別患者的腦腫瘤組織中,ACRBP-V5a剪接異構體的表達無明顯差異(P0.05);在高年齡組與低年齡組患者的腦腫瘤組織中,V5a剪接異構體的表達無明顯差異(P0.05);在KPS評分≥70和KPS評分70患者的腦腫瘤組織中,ACRBP-V5a剪接異構體的表達無明顯差異(P0.05);高級別與低級別腦腫瘤組織中ACRBP-V5a的表達無明顯差異(P0.05);(7)在不同等級和不同類型的ACRBP-V5a陽性腦腫瘤組織中,ACRBP-V5a剪接變體的相對表達水平在年齡、腫瘤分級和腫瘤類型中存在統(tǒng)計學差異(P0.05),而在性別和卡氏功能狀態(tài)評分標準(KPS)等方面沒有統(tǒng)計學差異(P0.05)。結論:ACRBP-V5a為一種新型的選擇性剪接異構體,可表達于多種類型的人類腦腫瘤和肝癌中。該剪接異構體的表達與腦腫瘤類型及其發(fā)生、發(fā)展可能有關。
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R739.41
【圖文】：

圖 1 ACRBP-V5a PCR 產物電泳圖Figure 1ACRBP-V5a PCR products electrophoresisRBPE5-8/ACRBP-V5a 在陽性樣本中的相對表達水平星形膠質瘤、膠質母細胞瘤和髓母細胞瘤患者 ACRBP-V5a 陽性，ACRBPE5-8/ACRBP-V5a 相對表達水平（均數(shù)±標準差）分別為胞瘤 107.3±160.3、膠質母細胞瘤 50.3±23.0、髓母細胞瘤 3.2±3.2（采用 Mann-Whitney U-檢驗,對星形細胞瘤、膠質母細胞瘤和髓母細樣本，按照腫瘤類型進行兩兩分類比較，其中星形細胞瘤和膠質之間 ACRBPE5-8/ACRBP-V5a 的表達水平無統(tǒng)計學差異（P>0.05）胞瘤和髓母細胞瘤之間 ACRBPE5-8/ACRBP-V5a 的表達水平有統(tǒng)計（P<0.01）,膠質母細胞瘤和髓母細胞瘤之間 ACRBPE5-8/ACRBP-V

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本文編號：2725946