【摘要】：第一部分ACTB基因多態(tài)性與高血壓及腦卒中關(guān)系的分子流行病學研究目的:長期的血壓升高可引起血管血流動力學改變、細胞增殖/凋亡失衡、內(nèi)皮損傷,血管內(nèi)膜增生、管腔徑比值變化,引發(fā)血管發(fā)生重塑。Rho/ROCK信號通路與血管重塑的發(fā)生有密切關(guān)系。ACTB基因作為Rho/ROCK信號通路下游的效應基因,其與高血壓和腦卒中的關(guān)系尚未見人群研究報道。本研究探討了ACTB基因多態(tài)性與高血壓和腦卒中的關(guān)系。方法:采用整群抽樣方法,抽取江蘇省宜興市2個鄉(xiāng)鎮(zhèn)共4128人進行流行病學調(diào)查,包括2012名高血壓病例及2116名血壓正常對象,另增加94名例血壓正常者老年對照,共計4222人進行高血壓的病例-對照研究。抽樣調(diào)查人群排除30例基線有腦卒中史對象后,共有4098人納入腦卒中隨訪;2116名血壓正常對象納入高血壓隨訪。采用基于連鎖不平衡和功能位點生物信息學預測相結(jié)合的方法,參考北京漢族人群Hap Map數(shù)據(jù)庫,按少見等位基因頻率(Minor allele frequency,MAF)0.05和r20.8,選擇標簽單核苷酸多態(tài)性(Tagging single nucleotide polymorphism,tag SNP),最終ACTB基因3個tag SNP納入分析。高血壓病例-對照研究結(jié)果采用多因素Logistic回歸模型分析SNP與高血壓之間的關(guān)聯(lián),并計算比值比(Odds Ratio,OR)及95%可信區(qū)間(Confidence interval,CI);高血壓和腦卒中的隨訪研究結(jié)果采用Cox回歸模型分析SNP與腦卒中、高血壓的關(guān)系,并計算風險比(Hazard ratio,HR)及95%CI。分析ACTB和飲酒與腦卒中發(fā)病的相加和相乘交互作用,相加交互作用通過計算相對超額危險度比(Relative excess risk due to interaction,RERI)、歸因比(Attributable proportion due to interaction,AP)和交互作用指數(shù)(Synergy index,SI)表示,相乘交互作用通過Logistic回歸模型計算相乘交互項表示。該交互作用結(jié)果在另一巢式病例-對照研究中進行驗證。結(jié)果:高血壓病例-對照研究顯示,在總?cè)巳褐?未觀察到ACTB與高血壓有顯著關(guān)聯(lián)。亞組分析結(jié)果顯示,在飲酒人群中,rs852426位點的變異(CC vs.TT/TC)與高血壓相關(guān),調(diào)整協(xié)變量后,OR值(95%CI)為1.971(1.053-3.691),P=0.034。隨訪研究顯示,在男性中,rs852423(AG/GG vs.AA)位點的變異顯著增加高血壓發(fā)病風險,調(diào)整的HR值(95%CI)為1.334(1.044-1.705),P=0.021;在女性中,rs852423位點GG基因型攜帶者發(fā)生高血壓風險顯著高于AA/AG基因型攜帶者,HR值(95%CI)為1.466(1.038-2.068),P=0.030。在年齡低于55歲人群中,rs852423位點AG變異顯著增加高血壓發(fā)病風險,HR值(95%CI)為1.261(1.008-1.578),P=0.043。在飲酒人群中,rs852426 TC/CC基因型攜帶者發(fā)生腦卒中的風險顯著低于TT基因型攜帶者,HR值(95%CI)為0.470(0.227-0.975),P=0.042。經(jīng)Bonferroni校正后,以上單點關(guān)聯(lián)結(jié)果均無統(tǒng)計學意義。相加交互作用分析顯示飲酒和rs852426與腦卒中有負交互作用,RERI(95%CI)為-0.907(-1.411,-0.404),P=4.108′10-4;相乘交互作用分析關(guān)聯(lián)仍有統(tǒng)計學意義,交互作用項HR值(95%CI)為0.541(0.291-0.994),P=0.048。在腦卒中的巢式病例對照研究中,飲酒和rs852426位點的交互作用與腦卒中發(fā)病有統(tǒng)計學意義,相加交互作用RERI(95%CI)為-0.370(-0.622,-0.118),P=3.945′10-3;相乘交互作用項OR值(95%CI)為0.749(0.575-0.976),P值為0.033。結(jié)論:ACTB基因rs852426位點變異與飲酒的交互作用與降低的腦卒中發(fā)病風險顯著關(guān)聯(lián),深入探討飲酒和ACTB基因多態(tài)性與腦卒中發(fā)病的關(guān)系將為腦卒中高危人群的防治提供科學依據(jù)。第二部分DIAPH1基因多態(tài)性與高血壓及腦卒中關(guān)系的分子流行病學研究目的:DIAPH1基因是ACTB上游調(diào)控基因,調(diào)節(jié)細胞骨架的合成,參與血管重塑的發(fā)生。DIAPH1基因已發(fā)現(xiàn)與人類巨血小板減少癥、聽力喪失、失明及腫瘤相關(guān),但是否與高血壓和腦卒中發(fā)病相關(guān)無研究報道。mi RNA表達水平的變化與腦卒中致病及預后過程密切相關(guān),是一類重要的分子標記物。本研究探討了DIAPH1基因多態(tài)性與高血壓和腦卒中的關(guān)系,分析DIAPH1基因m RNA表達水平、血漿mi RNA與腦卒中的關(guān)系。方法:采用流行病學整群抽樣方法,選取江蘇宜興市6個鄉(xiāng)鎮(zhèn)共4128人進行流行病學調(diào)查,包括2012名高血壓病例及2116名血壓正常對照,另增加94例老年血壓正常對照,共計4222人進行高血壓病例-對照研究。排除94例老年對照及30例基線有腦卒中史對象后,4098人納入腦卒中隨訪;2116名血壓正常對象納入高血壓隨訪。采用基于連鎖不平衡和功能位點預測相結(jié)合的策略,參考北京漢族人群Hap Map數(shù)據(jù)庫,按最小等位基因頻率(Minor allele frequency,MAF)0.05和r20.8選擇標簽單核苷酸多態(tài)性(Tagging single nucleotide polymorphism,tag SNP),最終納入DIAPH1基因5個tag SNP rs3805691、rs251018、rs251019、rs7703688和rs11954998分析�；趍i RNA芯片在缺血性卒中(Ischemic stroke,IS)、出血性卒中(Hemorrhagic stroke,HS)篩選結(jié)果,進一步擴大驗證篩選差異表達mi RNA。檢測IS和高血壓對照外周單核細胞DIAPH1基因m RNA表達水平。采用多因素Logistic回歸模型分析DIAPH1與高血壓之間的關(guān)聯(lián),并計算比值比(Odds Ratio,OR)及95%可信區(qū)間(Confidence interval,CI);采用Cox回歸模型分析探討DIAPH1與腦卒中的關(guān)系,并計算風險比(Hazard ratio,HR)及95%CI。結(jié)果:高血壓病例-對照研究顯示,rs251018(GG vs TT/TG)、rs251019(TT vs CC/CT)和rs7703688(CC vs TT/TC)與高血壓有顯著關(guān)聯(lián),調(diào)整性別、年齡、BMI、TC、TG、HDL-C、LDL-C、GLU、吸煙和飲酒協(xié)變量后,OR值(95%CIs)分別為0.572(0.384-0.852)、0.791(0.636-0.984)和0.315(0.152-0.650),P值分別為0.006、0.035和0.002。經(jīng)Bonferroni校正后,rs251018和rs7703688位點與高血壓的關(guān)聯(lián)仍有顯著意義。隊列研究中,未觀察到DIAPH1基因變異與高血壓、腦卒中發(fā)病有顯著關(guān)聯(lián)。腦卒中病例-對照研究結(jié)果顯示,rs3805691和rs251019位點CT變異與IS呈負關(guān)聯(lián),調(diào)整協(xié)變量年齡、性別、TC、TG、HDL-C、LDL-C、GLU、BMI、吸煙、飲酒、高血壓和糖尿病后,OR值(95%CIs)分別為0.782(0.700-0.874)和0.813(0.734-0.900),P值分別為1.300′10-5和6.200′10-5。Rs7703688和rs11954998位點TC變異顯著增加IS發(fā)病風險,調(diào)整的OR值(95%CIs)分別為1.721(1.486-1.993)和1.537(1.356-1.743),P值分別為4.139′10-12和2.058′10-11。以上關(guān)聯(lián)結(jié)果在IS亞型中,經(jīng)Bonferroni校正后,仍有統(tǒng)計學意義。IS病例血漿mi R-20a-5p、mi R-342-3p、mi R-223-3p、mi R-1274b、mi R-335-5p和mi R-126-3p表達水平顯著高于對照(P0.05),mi R-340-5p和mi R-484表達水平顯著低于對照(P0.001)。血漿mi R-20b-5p和mi R-93-5p表達水平在HS中顯著上調(diào),P值分別為0.009和0.001;mi R-511-5p和mi R-1243表達水平在HS血漿中顯著下調(diào),P0.05。在IS病例中,血漿mi R-193-3p表達水平在rs3805691位點CC、CT和TT基因型攜帶者間存在線性上升趨勢,Ptrend值為0.028;mi R-522-3p和mi R-484表達水平在rs251019位點TT、TC、CC三種基因型間存在線性上升趨勢,Ptrend值分別為0.007和0.005。在對照中,mi R-484表達水平在rs3805691位點CC、CT、TT三種基因型間存在線性下降趨勢,而mi R-628-3p表達水平呈現(xiàn)上升趨勢,Ptrend0.001;mi R-20a-5p、mi R-191-5p和mi R-1243表達水平均在rs251019位點TT、TC、CC基因型間有顯著上升趨勢。高血壓對照外周單核細胞DIAPH1基因m RNA表達水平顯著高于IS病例,P值為0.003。結(jié)論:DIAPH1基因rs3805691、rs251019、rs7703688和rs11954998位點變異與腦卒中發(fā)病顯著相關(guān),并且與IS臨床亞型SAA和LAA均顯著關(guān)聯(lián);IS病例外周單核細胞DIAPH1基因m RNA表達水平顯著下調(diào);篩選出差異表達的血漿mi RNA可做為IS和HS臨床診斷和治療的潛在生物標志物。
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R544.1;R743.3
【圖文】：

14圖 1 宜興社區(qū)人群流行病學調(diào)查及隨訪流程圖2.2 基線調(diào)查人群基線調(diào)查包括問卷調(diào)查、人體指標測量和血樣本采集。所有現(xiàn)場調(diào)查工作均在官林、徐舍鎮(zhèn)的社區(qū)衛(wèi)生服務中心或社區(qū)工作站完成。所有調(diào)查均由培訓合格的調(diào)查人員采用統(tǒng)一的調(diào)查表進行調(diào)查。收集人口學一般資料、吸煙、飲酒等生活方式，收集常見慢病史包括高血壓、糖尿病、血脂異常和冠心病史，以及收集對象高血壓、糖尿病、腦卒中和冠心病家族史信息。吸煙定義為每周吸煙至少 20 支且每年吸煙 3 個月以上。飲酒定義為目前或過去每周飲酒≥2 次/天，持續(xù)半年，據(jù)此標準，基線飲酒者為 901 人。含酒精飲料分為 3 類：白酒、啤酒和葡萄酒的酒精含量分別設(shè)為 42%、3%、10%, 消耗的酒精量以克/每天計算。以 15g 乙醇/天攝入作為 1 個標準 Drink/d，參與者

小鼠動物模型研究發(fā)現(xiàn)，慢性酒精刺激可通過激活腎素血管緊張素系統(tǒng)，誘導血管形成 O2-，血管氧化損傷；降低一氧化氮生物合成，導致血管異常收縮，血壓升高[39]。一項納入 32389 名中國北方男性的前瞻性隊列研究顯示，少量至重度飲酒男性發(fā)生高血壓的風險顯著高于不飲酒人群；但飲酒與高血 壓 的 內(nèi) 在 生 物 學 關(guān) 聯(lián) 并 未 闡 述[40]。 根 據(jù) 生 物 信 息 學 網(wǎng) 站（http://www.broadinstitute.org/mpg/ snap/ldplot.php）顯示，與 rs852426 位點緊密連鎖位點如圖 2 所示，rs2537620、rs852432、rs2966450 和 rs852446 四個位點與 rs852426 緊密連鎖（r2>0.8），對這一區(qū)域精細定位研究可能有助于進一步發(fā)現(xiàn)影響血管發(fā)育的易感位點。本研究發(fā)現(xiàn)，在飲酒人群中觀察到 rs852426CC 基因型攜帶者發(fā)生高血壓的風險高于 rs852426 TT/TC 基因型攜帶者（雖然經(jīng)多重校正后無統(tǒng)計學意義），ACTB 和飲酒與高血壓的關(guān)系值得進一步關(guān)注。

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 陳偉偉;高潤霖;劉力生;朱曼璐;王文;王擁軍;吳兆蘇;李惠君;顧東風;楊躍進;鄭哲;蔣立新;胡盛壽;;《中國心血管病報告2017》概要[J];中國循環(huán)雜志;2018年01期

本文編號：2718899