本文關(guān)鍵詞：硫化氫通過(guò)上調(diào)瘦素信號(hào)通路拮抗甲醛誘導(dǎo)的HT22細(xì)胞衰老，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：【研究背景與目的】大量研究證實(shí)甲醛(Formaldehyde,FA)對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有毒性作用。硫化氫(Hydrogen sulfide,H2S),作為一種神經(jīng)保護(hù)劑,我們發(fā)現(xiàn)其可以抑制FA誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡、細(xì)胞毒性及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,表明H2S具有抗FA神經(jīng)毒性的作用,但其具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。神經(jīng)細(xì)胞衰老在神經(jīng)退行性疾病的病理生理機(jī)制中具有重要地位,我們推測(cè)細(xì)胞衰老在FA神經(jīng)毒性中具有重要價(jià)值。瘦素(leptin)具有中樞神經(jīng)系統(tǒng)保護(hù)作用,我們既往發(fā)現(xiàn)H2S可以通過(guò)上調(diào)leptin信號(hào)通路拮抗檳榔堿引起的PC12細(xì)胞凋亡、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激從而發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。因此,在本研究中,我們擬探討細(xì)胞衰老是否參與了FA導(dǎo)致的神經(jīng)毒性?H2S可否拮抗FA誘導(dǎo)的HT22細(xì)胞衰老?以及l(fā)eptin信號(hào)通路可否介導(dǎo)H2S的這一作用?【方法】細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒(Cell counting Kit-8,CCK8)法檢測(cè)細(xì)胞活力;β-半乳糖苷酶染色(Senescence Associated acidic-β-Galactosidas,SA-β-Gal)法檢測(cè)衰老細(xì)胞;臺(tái)盼藍(lán)計(jì)數(shù)法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況并繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線;蛋白免疫印跡(Western Blot)法檢測(cè)leptin、lepRb以及細(xì)胞衰老相關(guān)蛋白p16INK4a和p21CIPl的表達(dá);ELISA法檢測(cè)HT22細(xì)胞培養(yǎng)上清液中l(wèi)eptin的含量�！窘Y(jié)果】1.FA(100,200μM)處理HT22細(xì)胞48 h可顯著降低HT22細(xì)胞的細(xì)胞活力,在HT22細(xì)胞上驗(yàn)證了FA的神經(jīng)細(xì)胞毒性。2.FA(50,100,200μM,48 h)能明顯增加HT22細(xì)胞SA-β-Gal染色陽(yáng)性率、上調(diào)細(xì)胞衰老相關(guān)蛋白(p16INK4a和p21CIPL)的表達(dá)、抑制HT22細(xì)胞生長(zhǎng),表明FA可誘導(dǎo)HT22細(xì)胞衰老。3.預(yù)處理NaHS(H2S的供體,400μM,30 min)可明顯抑制FA誘導(dǎo)的HT22細(xì)胞活力下降,在HT22細(xì)胞上驗(yàn)證了H2S的抗FA神經(jīng)細(xì)胞毒性作用。4.NaHS(400μM,30 min)預(yù)處理能明顯逆轉(zhuǎn)FA(100μM,48 h)誘導(dǎo)的HT22細(xì)胞SA-β-Gal染色陽(yáng)性率增加、p16INK4a及p21CIP1蛋白表達(dá)增加、細(xì)胞生長(zhǎng)抑制,表明H2S可拮抗FA誘導(dǎo)的HT22細(xì)胞衰老。5.FA(50,100,200μM,48 h)可濃度依賴(lài)性地下調(diào)HT22細(xì)胞中l(wèi)eptin及l(fā)epRb蛋白表達(dá)、降低細(xì)胞培養(yǎng)上清液中l(wèi)eptin的含量,提示FA的神經(jīng)毒性與其抑制leptin信號(hào)通路有關(guān)。6.NaHS(100,200,400μM,48 h)可濃度依賴(lài)性的增加HT22細(xì)胞leptin、lepRb表達(dá)及培養(yǎng)上清液中l(wèi)eptin的含量,且預(yù)處理NaHS(400μM,30 min)可明顯逆轉(zhuǎn)FA對(duì)leptin信號(hào)通路的下調(diào),提示H2S抗神經(jīng)細(xì)胞衰老可能與其上調(diào)leptin信號(hào)通路有關(guān)。7.預(yù)處理leptin tA(leptin信號(hào)通路抑制劑,50 nM)能取消NaHS對(duì)FA誘導(dǎo)HT22細(xì)胞活力下降以及細(xì)胞衰老的拮抗作用,表明leptin信號(hào)通路介導(dǎo)了H2S抗FA誘導(dǎo)的HT22細(xì)胞衰老。【結(jié)論】1.FA可以誘導(dǎo)HT22細(xì)胞衰老;2.H2S可拮抗FA誘導(dǎo)的HT22細(xì)胞衰老;3.leptin信號(hào)通路介導(dǎo)H2S抗FA誘導(dǎo)的HT22細(xì)胞衰老。
【關(guān)鍵詞】：硫化氫 甲醛 細(xì)胞衰老 leptin信號(hào)通路
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R741
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-12
• 第一章 緒論12-16
• 第二章 材料與方法16-22
• 1. 主要儀器和試劑16-18
• 2. 藥品與試劑的配制18-19
• 3. 實(shí)驗(yàn)方法19-22
• 第三章 結(jié)果22-34
• 1. 甲醛 (Formaldehyde, FA) 可降低HT22細(xì)胞活力22
• 2. FA可誘導(dǎo)HT22細(xì)胞衰老22-24
• 3. H_2S可抑制FA降低的HT22細(xì)胞活力下降24
• 4. H_2S拮抗FA誘導(dǎo)的HT22細(xì)胞衰老24-26
• 5. H_2S上調(diào)HT22細(xì)胞leptin信號(hào)通路26-29
• 6. 阻斷l(xiāng)eptin信號(hào)通路可逆轉(zhuǎn)H_2S對(duì)FA誘導(dǎo)HT22細(xì)胞衰老的拮抗作用29-34
• 第四章 討論34-38
• 第五章 實(shí)驗(yàn)結(jié)論38-40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 文獻(xiàn)綜述 瘦素與阿爾茲海默病44-52
• 參考文獻(xiàn)47-52
• 碩士期間發(fā)表的論文52-54
• 致謝54

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本文編號(hào)：271329