【摘要】：目的:觀察腦缺血后大鼠海馬不同腦區(qū)腦源性神經營養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)和多種mRNA轉錄本的表達,為后續(xù)研究其組蛋白乙酰化修飾變化奠定基礎,開辟一條治療腦損傷的新途徑。方法:Wistar雄性大鼠,體重180-250g,隨機分為對照組、假手術組和缺血模型組(6h、24h、48h三個組),每組分籠飼養(yǎng),每籠放2只,飼養(yǎng)于12 h晝夜循環(huán)的安靜環(huán)境中,自由攝食飲水,術前適應新環(huán)境1周。大鼠術前禁食過夜,用水合氯醛麻醉(40 mg/100 g,i.p.)后將大鼠固定于操作臺上。先沿第一頸椎內斜向上的神經來尋找翼突孔,用尖端細長的電烙鐵電凝雙側翼小孔下方的椎動脈,縫合皮膚。然后頸部正中切口,分離雙側頸總動脈,穿線并縫合皮膚,夜間禁食。次日,用微創(chuàng)動脈夾夾閉清醒大鼠的雙側頸總動脈15 min,造成短暫前腦缺血。假手術組中除不電凝椎動脈和不夾閉頸總動脈外,其他操作與缺血模型組相同。對照組不做任何處理。模型制作成功后,從五個組隨機抽取大鼠斷頭取腦并把海馬區(qū)分為CA1、CA3區(qū),進行Western Blot和qPCR實驗,對BDNF蛋白及BDNF mRNA定量。其余的大鼠養(yǎng)7d后灌注切片進行尼氏染色實驗,顯微鏡下觀察海馬CA1、CA3區(qū)錐體神經元的變化。結果:1.尼氏染色結果顯示:對照組和假手術組兩組大鼠的海馬CA1區(qū)神經元結構正常,細胞核圓而規(guī)則。缺血模型組大鼠海馬CA1區(qū)正常神經元數量顯著減少,大量錐體神經元變性壞死,細胞核不規(guī)則并固縮深染,細胞間隙明顯增大。2.qPCR結果顯示:缺血后CA3區(qū)6h組BDNF m RNA I,BDNF mRNA IV表達量分別與假手術組的表達量相比顯著增加(n=3,P0.05),BDNF mRNA VIII明顯增加(n=3,P0.01),缺血后CA3區(qū)48h組BDNF mRNA IIb明顯增加(n=3,P0.05),缺血后CA1區(qū)6h組BDNF mRNA VI表達量明顯增加(n=3,P0.05),BDNF mRNA IIa、BDNF mRNA IIc、BDNF mRNA III、BDNF mRNA V、BDNF mRNA VII、BDNF mRNA IX無明顯變化。3.Western Blot結果顯示:模型組大鼠CA1區(qū)之間BDNF蛋白表達無統計學差異;模型組與假手術組和正常組相比,大鼠海馬CA1區(qū)BDNF蛋白表達水平顯著降低,有統計學意義(P0.05,n=3);模型組海馬CA3區(qū)與假手術組、正常組CA3區(qū)相比,BDNF蛋白表達無統計學差異。結論:1.用改良的Pulsinelli四血管夾閉法能成功建立大鼠腦缺血模型。2.模型組大鼠海馬CA1區(qū)和CA3區(qū)具有不同的BDNF mRNA轉錄本改變。3.BDNF蛋白表達量與不同的BDNF mRNA轉錄本改變有關。
【圖文】：

腦缺血再灌注后7d海馬腦區(qū)CA1和CA3的組織病理學變化

圖 2-1.模型組與假手術組、正常組 BDNF 蛋白表達結果比較圖左：各組大鼠海馬 CA1 區(qū)、CA3 區(qū) BDNF 蛋白和全蛋白的表達水平；圖右: 各組大鼠海馬CA1 區(qū)和 CA3 區(qū) BDNF 蛋白的表達量的結果圖，三個模型組 CA1 區(qū)與假手術組、正常組 CA1區(qū)比較，BDNF 蛋白表達量明顯減少（n=8,*P＜0.05），有統計學意義。三個模型組 CA3 區(qū)與假手術組、正常組 CA3 區(qū)比較,結果無明顯變化。2.2 PCR 結果腦缺血模型大鼠海馬 CA1、CA3 區(qū) BDNF mRNA 各轉錄本水平表達發(fā)生變化。熒光定量 PCR 結果顯示，通過對海馬 CA1 區(qū)與 CA3 區(qū) BDNF mRNA 不同轉錄本表達量進行檢測，發(fā)現缺血后CA3區(qū)6h組BDNF mRNAI和BDNF mRNA
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R743.3

【參考文獻】

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本文編號：2600348