【摘要】：第一部分去乙�；敢种苿㏒AHA對(duì)小鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用目的:探討去乙�；敢种苿�(Histone deacetylase inhibitors,HDACis)辛二酰苯胺異經(jīng)肟酸(Suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)對(duì)小鼠缺血再灌注性腦損傷的保護(hù)作用及其可能的分子機(jī)制。方法:健康雄性BALB/c小鼠隨機(jī)分為4組:假手術(shù)組(Sham)、缺血再灌注組(I/R)、SAHA組、溶劑對(duì)照組(DMSO)。I/R組采用改良Zea-Longa線栓法建立小鼠大腦中動(dòng)脈缺血60min后再灌注24h的損傷模型。SAHA組為三個(gè)亞組,分別于再灌注時(shí)尾靜脈注射不同濃度的SAHA100μl(SAHA1組12.5mg/Kg;SAHA2 組 SAHA 25mg/Kg;SAHA3 SAHA 50mg/Kg)。DMSO組:再灌注時(shí)尾靜脈注射100μl25%DMSO。再灌注后24h進(jìn)行神經(jīng)功能缺陷評(píng)分,此后處死小鼠,TTC染色觀察腦梗死體積、Western blot檢測(cè)腦組織蛋白的乙酰化水平。結(jié)果:缺血再灌注24h,I/R組和SAHA組均出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)功能障礙,神經(jīng)功能缺陷評(píng)分在1-3分之間,Sham組無(wú)神經(jīng)功能缺陷。與DMSO組相比,25mg/kg及50mg/kg SAHA均能顯著改善神經(jīng)功能障礙癥狀,減小腦梗死體積,與II/R組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。Western blot結(jié)果顯示,I/R組小鼠缺血側(cè)大腦的乙酰化水平較Sham組明顯下降。SAHA處理可使正常小鼠腦蛋白的乙�；龈�,缺血再灌注后立刻給予25mg/Kg和50mg/Kg的SAHA,可顯著抑制腦缺血誘導(dǎo)的乙酰化水平下降(P0.05)。結(jié)論:小鼠缺血再灌注后予SAHA處理可以改善神經(jīng)功能缺損,減少腦梗死體積,提高蛋白的乙�；�,具有一定的腦保護(hù)作用。第二部分去乙�；敢种苿㏒AHA對(duì)小鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用的定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究目的:在前期SAHA對(duì)小鼠MCAO模型腦缺血損傷保護(hù)作用研究的基礎(chǔ)上,通過(guò)基于iTRAQ標(biāo)記的定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法探討其對(duì)缺血再灌注性腦損傷保護(hù)作用的可能分子機(jī)制。方法:線栓法建立小鼠局灶性大腦中動(dòng)脈缺血再灌注模型(MCAO);采用iTRAQ穩(wěn)定同位素標(biāo)記和2D nanoLC/MS/MS的定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法檢測(cè)差異表達(dá)蛋白,Gene ontology(GO)分析差異表達(dá)蛋白的生物學(xué)功能,IPA(Ingenuity Pathway Analysis)分析與差異蛋白相關(guān)的生物學(xué)途徑,并通過(guò)Western blot和ICC驗(yàn)證蛋白質(zhì)組學(xué)的檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果:本研究分為Sham組、SAHA處理的Sham組、MCAO組、SAHA處理的MCAO組。通過(guò)與Sham組相比,分析缺血和SAHA處理對(duì)腦蛋白質(zhì)表達(dá)譜的影響,與缺血組相比分析SAHA處理對(duì)缺血腦蛋白表達(dá)譜的影響。在所檢測(cè)的樣本中共鑒定到1577種蛋白質(zhì)(FDR1%),其中1117種蛋白具有2條或2條以上的肽段,1113種蛋白具有定量信息。缺血再灌注組與假手術(shù)組相比,68種蛋白質(zhì)的表達(dá)發(fā)生顯著變化(增加或降低1.5倍),其中上調(diào)的蛋白33種,下調(diào)的35種。上調(diào)的主要是血液的蛋白成分(HEMO,HPT和FIBG等)、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞特異表達(dá)的蛋白(GFAP,EAA2和MAG等),下調(diào)的蛋白包括細(xì)胞骨架成分(Tau),參與蛋白合成和修飾的蛋白(EF1A1,ALG2),轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)蛋白(CAMKV,S12A5,VPS52)。與缺血再灌注相比,SAHA的處理改變了部分缺血再灌注組差異蛋白的變化趨勢(shì),缺血后增加的33種蛋白中有14種被下調(diào),而34種下降的蛋白中則有19種被上調(diào),這也是本研究最重要的發(fā)現(xiàn)。Western blot驗(yàn)證了 4種因SAHA處理而改變變化趨勢(shì)的蛋白:GFAP,EAA2,Tau和GSK3β。結(jié)論:本研究首次從蛋白質(zhì)組的層面展現(xiàn)了 HDACi對(duì)腦缺血再灌注損傷所具有的多重保護(hù)作用,包括:1、保護(hù)血腦屏障,2、降低膠質(zhì)細(xì)胞活化,3、穩(wěn)定細(xì)胞和組織結(jié)構(gòu),4、改善能量代謝。這不僅證實(shí)了已有的研究結(jié)果,更重要的是,SAHA的處理可以部分改變?nèi)毖獙?duì)腦蛋白表達(dá)影響的趨勢(shì),這有可能是SAHA對(duì)腦缺血損傷多重保護(hù)作用的重要原因。此外,星形膠質(zhì)細(xì)胞也被發(fā)現(xiàn)參與了 SAHA對(duì)腦缺血的保護(hù)作用。
【圖文】：

ＶＰＡ）和４苯下酸鋼（ｓｏｄｉｕｍ４－ｐｈｅｎｙＩｂｕｔｙｒａｔｅ，邋４ＰＢＡ），另一類是含有異哲朽酸逡逑的邋ＨＤＡＣｉ，如曲古抑滴素（ｔｒｉｃｈｏｓ包加邋Ａ，邋ＴＳＡ））和邋ＳＡＨＡ邋（ｓｕｂｅｒｏｙｌａｎ化ｄｅ逡逑ｈｙｄｒｏｘａｍｉｃａｃｉｄ），它們都是非特異性的泛去己憸化酶抑制劑（圖１）。最近的在逡逑８逡逑

要闡明非特異性ＨＤＡＣｉｓ的特異性神經(jīng)保護(hù)作用的分子機(jī)制就必逡逑須考慮到ＨＤＡＣｉｓ對(duì)蛋白表達(dá)（轉(zhuǎn)錄）和蛋白乙憸化修飾（非轉(zhuǎn)錄）兩方面的影逡逑響，，并評(píng)估二者在此過(guò)程中的貢獻(xiàn)（圖２）。由于卒中是一極其復(fù)雜的病理生理逡逑過(guò)程，而蛋白質(zhì)的石酷化又具有廣泛的調(diào)節(jié)作用，傳統(tǒng)的還原論方法很難描述逡逑與分析ＨＤＡＣｉｓ對(duì)缺血神經(jīng)元保護(hù)作用過(guò)程中復(fù)雜的分子事件，因此有必要采用逡逑系統(tǒng)生物學(xué)的方法來(lái)全面解析這一過(guò)程。逡逑基于質(zhì)譜技術(shù)的蛋白質(zhì)組學(xué)方法是目前研巧包括己憸化在內(nèi)的多種蛋白質(zhì)逡逑翻譯后修飾（ＰＴＭｓ）最有力的工具。本研究巧建立原代培養(yǎng)大鼠皮層神經(jīng)元細(xì)逡逑胞的體外缺血模型，親和層析富集己憸化膚段，采用基于ｉＴＲＡＱ〔ｉｓｏｂａｒｉｃ掃ｇ化ｒ逡逑ｒｅｌａｔｉｖｅ邋ａｎｄ邋ａｂｓｏｌ山：ｅ邋ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ邋）穩(wěn)定同位素標(biāo)記和在線二維納流液相結(jié)合串逡逑聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)（ｏｎｌｉｎｅ邋２Ｄ邋ｎａｎｏ邋ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）的差異蛋白質(zhì)組學(xué)方法，檢測(cè)泛立憸逡逑１２逡逑
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R743.3

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