阿曼托雙黃酮對(duì)癲癇小鼠海馬神經(jīng)元的保護(hù)作用
發(fā)布時(shí)間:2019-09-24 05:20
【摘要】:目的研究阿曼托雙黃酮對(duì)匹羅卡品點(diǎn)燃小鼠癲癇發(fā)作及海馬神經(jīng)元的影響,并探討其機(jī)制。 方法雄性KM小鼠,隨機(jī)分為5組:阿曼托雙黃酮預(yù)處理組(AP組)、阿曼托雙黃酮治療組(AT組)、丙戊酸鈉治療組(VPA組)、癲癇組(EP組)、空白對(duì)照組(Blank組)。給予阿曼托雙黃酮干預(yù),并建立匹羅卡品癲癇小鼠模型,應(yīng)用行為學(xué)觀測(cè)和腦電信號(hào)監(jiān)測(cè)、Nissel染色、TUNEL染色、免疫組化、Western-Blot等技術(shù),了解AF對(duì)點(diǎn)燃小鼠癲癇發(fā)作以及海馬神經(jīng)元的影響。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均用x±s表示,采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)的方差分析,兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)或Dunnett-t檢驗(yàn),以P0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 1.動(dòng)物行為學(xué)表現(xiàn)與腦電信號(hào):Blank組小鼠無(wú)癲癇發(fā)作。注射匹羅卡品后,AT組、EP組與Blank組相比,腦電信號(hào)表現(xiàn)不穩(wěn)定,可見(jiàn)持續(xù)的癲癇樣放電,動(dòng)物伴隨Ⅲ~Ⅴ級(jí)癲癇發(fā)作;AP組和VPA組小鼠均無(wú)癲癇大發(fā)作出現(xiàn),偶見(jiàn)I~Ⅱ級(jí)發(fā)作,且發(fā)作時(shí)間明顯縮短,腦電信號(hào)表現(xiàn)與Blank組相似。 2. Nissl染色:AP組(121.40±8.72)和Blank組(125.20±9.96)小鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元數(shù)目無(wú)明顯減少,神經(jīng)元邊緣清晰,排列整齊,胞漿中可見(jiàn)尼氏小體。而AT組(84.60±6.19)、VPA組(70.25±4.34)和EP組(65.30±7.53)海馬CA1區(qū)則有明顯的神經(jīng)元丟失,神經(jīng)元排列松散、缺失嚴(yán)重,胞漿染色深淺不一,核仁消失或不明顯。 3.免疫組織化學(xué):應(yīng)用平均光密度值法檢測(cè)NF-κB p65表達(dá)量: AP組、AT組、VPA組、EP組和Blank組NF-κB p65的表達(dá)量分別為4204.26±116.30,15291.21±501.56,35599.58±2742.78,35710.87±2570.31,3185.12±251.35。AP組和Blank組與EP組、AT組、VPA組相比,NF-κB p65表達(dá)量的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P㩳0.01)。 4. TUNEL染色:SE后72小時(shí),在AT組(7.40±1.57)、VPA組(12.75±2.61)和EP組(12.55±3.25)小鼠海馬的CA1區(qū)可見(jiàn)較多的TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞。而AP組(1.70±0.98)和Blank組(0.55±0.51)小鼠海馬CA1區(qū)幾乎看不到TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞,與EP組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P㩳0.01)。 5. Western Blot: AP組(0.49±0.13)與Blank組(0.33±0.12) NF-κB p65蛋白表達(dá)量無(wú)顯著差異,而AT組(0.71±0.09)、VPA組(1.18±0.19)、EP組(1.10±0.17)較Blank組均顯著升高(P㩳0.01),而AP組與Blank組統(tǒng)計(jì)學(xué)無(wú)顯著性差異(P0.05)。 結(jié)論阿曼托雙黃酮對(duì)癲癇模型具有顯著的預(yù)防驚厥發(fā)生和神經(jīng)保護(hù)作用,其作用機(jī)制與阿曼托雙黃酮抑制癲癇發(fā)生時(shí)的腦內(nèi)炎癥反應(yīng)有關(guān)。
【圖文】:
LFP 信號(hào)分析。A:雙黃酮預(yù)處理組; B:雙黃酮預(yù)治療組; C:丙戊酸D:癲癇組;E:空白對(duì)照組。3. 免疫組織化學(xué):NF-κB p65 免疫組化染色陽(yáng)性結(jié)果為海馬 CA1 區(qū)神經(jīng)元胞核呈棕均光密度值法檢測(cè)各組 NF-κB p65 的表達(dá)量(圖 3)。阿曼托雙、阿曼托雙黃酮治療組、丙戊酸鈉治療組、癲癇組和空白對(duì)照組 N 達(dá) 量 分 別 為 4204.26±116.30 , 15291.21±501.56 , 35599.58±20.87±2570.31,3185.12±251.35。阿曼托雙黃酮預(yù)處理組與癲癇組酮治療組、丙戊酸鈉治療組和癲癇組與空白對(duì)照組之間 NF-κB p6異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P㩳0.01),而阿曼托雙黃酮預(yù)處理組與空白對(duì)量統(tǒng)計(jì)學(xué)無(wú)顯著性差異(P㧐0.05)。提示阿曼托雙黃酮預(yù)處理能
小鼠海馬 CA1 區(qū) NF-κB p65 表達(dá)情況(免疫組化,×400)。A1:阿曼托雙黃組(AP),偶見(jiàn)散在 NF-κB p65 陽(yáng)性細(xì)胞,且著色淺;A2:阿曼托雙黃酮治療組(較多量染色陽(yáng)性細(xì)胞,著色較深,,呈棕褐色;A3:丙戊酸鈉治療組(VPA),量染色陽(yáng)性細(xì)胞,著色較深,呈棕褐色;A4:癲癇組(EP),可見(jiàn)大量 NF-κB細(xì)胞,著色深,呈棕褐色;A5:空白對(duì)照組(Blank),未見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞。4. Nissl 染色:4.1 小鼠海馬神經(jīng)元形態(tài)改變:阿曼托雙黃酮預(yù)處理組和空白對(duì)照組 CA1 區(qū)神經(jīng)元邊緣清晰,排列整齊,胞漿中可見(jiàn)尼氏小體。與此相托雙黃酮治療組、丙戊酸鈉治療組和癲癇組小鼠海馬 CA1 區(qū)神經(jīng)元、缺失嚴(yán)重,胞漿染色深淺不一,核仁消失或不明顯。阿曼托雙黃酮癲癇小鼠海馬神經(jīng)元的損傷有保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】:寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2014
【分類號(hào)】:R742.1
【圖文】:
LFP 信號(hào)分析。A:雙黃酮預(yù)處理組; B:雙黃酮預(yù)治療組; C:丙戊酸D:癲癇組;E:空白對(duì)照組。3. 免疫組織化學(xué):NF-κB p65 免疫組化染色陽(yáng)性結(jié)果為海馬 CA1 區(qū)神經(jīng)元胞核呈棕均光密度值法檢測(cè)各組 NF-κB p65 的表達(dá)量(圖 3)。阿曼托雙、阿曼托雙黃酮治療組、丙戊酸鈉治療組、癲癇組和空白對(duì)照組 N 達(dá) 量 分 別 為 4204.26±116.30 , 15291.21±501.56 , 35599.58±20.87±2570.31,3185.12±251.35。阿曼托雙黃酮預(yù)處理組與癲癇組酮治療組、丙戊酸鈉治療組和癲癇組與空白對(duì)照組之間 NF-κB p6異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P㩳0.01),而阿曼托雙黃酮預(yù)處理組與空白對(duì)量統(tǒng)計(jì)學(xué)無(wú)顯著性差異(P㧐0.05)。提示阿曼托雙黃酮預(yù)處理能
小鼠海馬 CA1 區(qū) NF-κB p65 表達(dá)情況(免疫組化,×400)。A1:阿曼托雙黃組(AP),偶見(jiàn)散在 NF-κB p65 陽(yáng)性細(xì)胞,且著色淺;A2:阿曼托雙黃酮治療組(較多量染色陽(yáng)性細(xì)胞,著色較深,,呈棕褐色;A3:丙戊酸鈉治療組(VPA),量染色陽(yáng)性細(xì)胞,著色較深,呈棕褐色;A4:癲癇組(EP),可見(jiàn)大量 NF-κB細(xì)胞,著色深,呈棕褐色;A5:空白對(duì)照組(Blank),未見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞。4. Nissl 染色:4.1 小鼠海馬神經(jīng)元形態(tài)改變:阿曼托雙黃酮預(yù)處理組和空白對(duì)照組 CA1 區(qū)神經(jīng)元邊緣清晰,排列整齊,胞漿中可見(jiàn)尼氏小體。與此相托雙黃酮治療組、丙戊酸鈉治療組和癲癇組小鼠海馬 CA1 區(qū)神經(jīng)元、缺失嚴(yán)重,胞漿染色深淺不一,核仁消失或不明顯。阿曼托雙黃酮癲癇小鼠海馬神經(jīng)元的損傷有保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】:寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2014
【分類號(hào)】:R742.1
【共引文獻(xiàn)】
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3 王U喅
本文編號(hào):2540692
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