【摘要】：目的 膠質瘤是人常見的顱內惡性腫瘤，傳統(tǒng)的手術及放化療效果不顯著。之前在諾帝(Nordy)誘導人惡性膠質瘤細胞U87MG分化的研究中發(fā)現(xiàn)瘤細胞在誘導分化后增殖活性明顯降低，且PRDX-1蛋白(Peroxiredoxin1，過氧化物氧化還原蛋白1)表達顯著減少，故推測PRDX-1可能與膠質瘤的惡性進展密切相關。本實驗擬通過檢測PRDX-1及其可能影響的分子通路的主要蛋白PTEN，EGFR，PI3K，Nrf2，NF-κB，，TNF-α在人膠質瘤組織中的表達水平并分析其與膠質瘤惡性程度的相關性，同時構建過表達及抑制PRDX-1表達的慢病毒載體并轉染入人惡性膠質瘤細胞U87MG中，觀測其生物學特征改變，探索PRDX-1在膠質瘤演變過程中的作用及可能的分子機制。 方法 檢索并收集2010-2011年新橋醫(yī)院病理科送檢手術切除的人膠質瘤標本，依據(jù)膠質瘤WHO2007標準分級，并對其進行免疫組織化學染色檢測PRDX-1，PTEN，EGFR，PI3K，Nrf2，NF-κB，TNF-α表達水平，顯微鏡下拍攝電子圖片，IPP6.0軟件定量分析圖片陽性部位平均光密度值(MOD)，分析其表達水平與膠質瘤惡性程度之間的關系；構建3組針對人PRDX-1基因的shRNA慢病毒表達載體，將其轉染至人惡性膠質瘤細胞U87MG，篩選并建立穩(wěn)定感染細胞系，Western blot、RT-PCR檢測轉染效率，并選擇抑制效率最高的細胞株檢測轉染前后U87MG細胞凋亡水平，集落形成能力，繪制生長曲線，免疫細胞化學染色檢測PRDX-1，PTEN，EGFR，PI3K，Nrf2，NF-κB，TNF-α在轉染前后表達水平有無顯著變化。構建針對人PRDX-1基因的過表達慢病毒載體，并轉染至人惡性膠質瘤細胞U87MG，篩選并建立穩(wěn)定感染細胞系，Western blot、RT-PCR檢測轉染效率，同時檢測轉染前后U87MG細胞凋亡水平，集落形成能力，繪制生長曲線，免疫細胞化學檢測PRDX-1，PTEN，EGFR，PI3K，Nrf2，NF-κB，TNF-α在轉染前后表達水平有無顯著變化。將上述檢測結果使用SPSS19軟件進行統(tǒng)計學分析，其中多組均值間比較使用單因素方差分析以及Dennett’s T3檢驗，兩組均值間比較使用T檢驗。 結果 PRDX-1，EGFR，PI3K，Nrf2，NF-κB，TNF-α在高級別膠質細胞瘤組織中的表達水平均顯著高于其在低級別膠質細胞瘤組織中的表達水平(P＜0.05)，且隨膠質瘤惡性程度的上升而呈顯著上升趨勢，而PTEN則相反(P＜0.05)；成功構建了pHBLV-PRDX-1過表達慢病毒載體及3組pHBLV-PRDX-1-shRNA干擾慢病毒載體，并將其與對應的空白對照慢病毒載體轉染入U87MG細胞，通過RT-PCR及Westernblot實驗篩選出抑制效率最高的pHBLV-PRDX-1-shRNA U87MG細胞株。與轉染前U87MG細胞及空白對照慢病毒載體轉染后U87MG細胞相比，轉染pHBLV-PRDX-1-shRNA慢病毒表達載體的細胞外形由梭形向長梭形轉變，細胞表面突起變長并增多，核分裂像減少，細胞內PRDX-1的mRNA及蛋白表達水平均顯著下降，細胞生長速度降低、凋亡水平上升、集落形成能力減弱，免疫細胞化學染色顯示PRDX-1，NF-κB，TNF-α表達水平較轉染前下降，PTEN，PI3K，Nrf2，EGFR表達水平則未見顯著變化。與轉染前U87MG細胞及空白對照慢病毒載體轉染后U87MG細胞相比，轉染pHBLV-PRDX-1過表達慢病毒載體的細胞形態(tài)由梭形向短梭形轉變，細胞表面突起減少，PRDX-1的mRNA及蛋白表達水平均顯著上升，細胞生長速度加快、凋亡水平下降、集落形成能力增強，免疫細胞化學染色顯示PRDX-1，NF-κB，TNF-α表達水平較轉染前顯著上升，PTEN，PI3K，Nrf2，EGFR表達水平未見顯著變化。 結論 PRDX-1在人膠質瘤組織中的表達水平與其惡性程度密切相關，對膠質瘤細胞的生長、凋亡及克隆形成能力也有重要影響。膠質瘤細胞中受Nrf2調控擴增的PRDX-1可通過TNF-α作用于膠質瘤細胞產(chǎn)生大量游離的NF-κB，參與調控細胞轉錄因子從而抑制膠質瘤細胞凋亡，促進其向惡性轉變；PRDX-1也可能通過與PTEN形成復合物，影響其對EGFR競爭性抑制及下游PI3K/AKT信號通路的傳導，一定程度參上與了膠質瘤惡變，但其機制尚需進一步研究證實。
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R739.41

【參考文獻】

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本文編號：2527594