發(fā)布時間：2019-01-05 02:48

【摘要】：研究背景與目的 人腦膠質(zhì)瘤是來源于神經(jīng)上皮的中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的原發(fā)性腦腫瘤，約占全部顱內(nèi)腫瘤的35.26％~60.96％，其具有血供豐富和侵襲性增殖等生物學(xué)特征，呈浸潤性生長，手術(shù)不易全切，治療效果差，而且在臨床上還具有高復(fù)發(fā)率，高死亡率，高致殘率和治愈率低的特征。目前的治療仍以手術(shù)治療為主結(jié)合放療、化療的綜合治療，雖然目前其診斷和規(guī)范治療如手術(shù)，放療和化療取得了很大的進(jìn)步，但是這些患者的預(yù)后依然很差。對于人腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展及治療研究仍是神經(jīng)外科及相關(guān)領(lǐng)域研究的重點之一。近年來隨著分子生物學(xué)在腫瘤研究中的進(jìn)展，腫瘤的靶向治療已成為腫瘤研究領(lǐng)域的重要課題。因此，尋求新的基因靶點治療膠質(zhì)瘤已成為當(dāng)前關(guān)注的焦點。 自噬是亞細(xì)胞水平上一個進(jìn)化相對保守的細(xì)胞功能，細(xì)胞為適應(yīng)環(huán)境保持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，將細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞器通過溶酶體降解為游離氨基酸及脂肪酸而實現(xiàn)了更新。自噬的負(fù)向調(diào)控如自噬活性的降低、信號及傳輸通路的改變，可能在多種腫瘤的產(chǎn)生及發(fā)展進(jìn)程中發(fā)揮重要作用，異常激活的自噬基因可以促進(jìn)或抑制某些腫瘤的演變。近年來發(fā)現(xiàn)的自噬基因Beclin-1，是一個與細(xì)胞自噬功能相關(guān)的候選抑癌基因，通過促進(jìn)自噬及誘導(dǎo)凋亡抑制腫瘤的產(chǎn)生及進(jìn)展，且在多種腫瘤中發(fā)現(xiàn)Beclin-1基因表達(dá)異常。Beclin-1基因主要是通過Ⅲ型磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol3-kinase class Ⅲ，PI3K）將多種自噬相關(guān)基因（Autophagy-related genes，ATG）蛋白定位于前自噬體分子構(gòu)成復(fù)合體進(jìn)一步控制自噬活性。mTOR (mammalian target of rapamycin)，即哺乳動物雷帕霉素靶蛋白。最近多種研究表明，細(xì)胞的生長增殖及存活如神經(jīng)再生、肌肉組織增生及某些腫瘤的演進(jìn)與其關(guān)系密切。研究發(fā)現(xiàn)，在調(diào)控自噬促進(jìn)細(xì)胞存活的調(diào)控機制中，Beclin-1介導(dǎo)的自噬/凋亡互反饋作用機制及mTOR介導(dǎo)的自噬與mTOR的互反饋調(diào)控作用成為重要的途徑，并形成一個由PI3K、Beclin-1和mTOR為節(jié)點靶點的PI3K-Beclin1-mTOR自噬交互調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。而有關(guān)Beclin-1和mTOR在人腦膠質(zhì)瘤中的研究，國內(nèi)外相關(guān)研究相對較少。本研究的主要目的是探索自噬基因Beclin-1和mTOR在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)，分析其與病理級別之間的關(guān)聯(lián)及二者的相關(guān)性，進(jìn)一步分析二者在腦膠質(zhì)瘤發(fā)生及發(fā)展中的作用，為腦膠質(zhì)瘤的治療提供新的思路。 材料與方法 腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本取自鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院神經(jīng)外科2012年7月-2013年8月43例手術(shù)標(biāo)本，所有病例均為首發(fā)病例，且術(shù)前均未行放療、化療及免疫治療，均有完整的臨床資料，其中男23例，女20例，年齡6-69歲，平均39.72±18.24歲。將43例腦膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本作為實驗組，按2007年WHO病理級別標(biāo)準(zhǔn)將腦膠質(zhì)瘤所有切片進(jìn)行分級（詳見表2.1），被歸類為低級別組（其中Ⅰ級2例，Ⅱ級20例）22例，高級別組（其中Ⅲ級12例、Ⅳ級9例）21例。另取11例來自同期收治的腦外傷或腦出血患者的非瘤腦組織標(biāo)本作為對照組。采用RT-PCR及免疫組化SP法檢測了43例腦膠質(zhì)瘤和11例非瘤腦組織中Beclin-1和mTOR基因mRNA及蛋白的表達(dá)情況，采用SPSS17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，兩組定量資料的比較采用兩獨立樣本t檢驗，多組定量資料的比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗；兩樣本率的比較采用四格表資料的χ2檢驗，差異性分析采用配對χ2檢驗；相關(guān)性分析用Pearson關(guān)聯(lián)性檢驗。以α=0.05作為差異顯著性檢驗水準(zhǔn)。 結(jié)果 1. Beclin-1的mRNA及蛋白的表達(dá)情況 Beclin-1的mRNA在非瘤腦組織、膠質(zhì)瘤組織、低級別組、高級別組中表達(dá)量依次為0.901±0.115、0.626±0.077、0.754±0.087、0.448±0.053，利用兩獨立樣本t檢驗示非瘤腦組織與膠質(zhì)瘤組織之間存在顯著統(tǒng)計學(xué)意義（t=10.853，p＜0.05），，經(jīng)單因素方差分析、LSD-t檢驗示非瘤腦組織與低級別組和高級別組兩兩之間均存在顯著統(tǒng)計學(xué)意義（F=92.445，p＜0.05）；Beclin-1蛋白在非瘤腦組織、膠質(zhì)瘤組織、低級別組、高級別組中的表達(dá)陽性率分別為100.0%、51.2%、68.2%和38.1%，利用四格表資料的χ2檢驗，示非瘤腦組織與膠質(zhì)瘤組織（χ2=6.856，p＜0.05）、低級別組和高級別組（χ2=3.909，p＜0.05）之間均存在顯著統(tǒng)計學(xué)意義。 2. mTOR的mRNA及蛋白的表達(dá)情況 mTOR的mRNA在非瘤腦組織、膠質(zhì)瘤組織、低級別組、高級別組中表達(dá)量依次為0.206±0.035、0.575±0.063、0.413±0.052、0.654±0.075，利用兩獨立樣本t檢驗示非瘤腦組織與膠質(zhì)瘤組織之間存在顯著統(tǒng)計學(xué)意義（t=-17.112，p＜0.05），經(jīng)單因素方差分析、LSD-t檢驗示非瘤腦組織與低級別組和高級別組兩兩之間均存在顯著統(tǒng)計學(xué)意義（F=103.419，p＜0.05）；mTOR蛋白在非瘤腦組織、膠質(zhì)瘤組織、低級別組、高級別組中的表達(dá)陽性率分別為18.2%、69.8%、54.5%和85.7%，利用四格表資料的χ2檢驗，示非瘤腦組織與膠質(zhì)瘤組織（χ2=7.636，p＜0.05）、低級別組和高級別組（χ2=4.949，p＜0.05）之間均存在顯著統(tǒng)計學(xué)意義。 3. Beclin-1和mTOR基因在膠質(zhì)瘤中表達(dá)的相關(guān)性 Beclin-1和mTOR的mRNA在人腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)量經(jīng)Pearson關(guān)聯(lián)性分析得出關(guān)聯(lián)系數(shù)r=-0.838，p＜0.05，具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異。Beclin-1和mTOR蛋白表達(dá)經(jīng)配對χ2檢驗得出r，=-0.493，p＜0.05，具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異。定量及定性分析結(jié)果均表明二者呈負(fù)相關(guān)。 結(jié)論 1. Beclin-1表達(dá)的mRNA及蛋白在非瘤腦組織高表達(dá)，在人腦膠質(zhì)瘤組織中隨病理級別的升高其表達(dá)量逐漸下調(diào)。 2. mTOR表達(dá)的mRNA及蛋白在非瘤腦組織低表達(dá)，在人腦膠質(zhì)瘤組織中隨病理級別的升高其表達(dá)量逐漸升高。 3. Beclin-1和mTOR在人腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，提示Beclin-1表達(dá)的下調(diào)可能通過mTOR介導(dǎo)的信號通路促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R739.41

【參考文獻(xiàn)】

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1 ;Rapamycin induces differentiation of glioma stem/progenitor cells by activating autophagy[J];癌癥;2011年10期

2 趙林濤;卞修武;姜建勇;王斌;平軼芳;余時滄;;下調(diào)CXCR4表達(dá)對膠質(zhì)瘤干細(xì)胞侵襲能力和VEGF分泌量的影響[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2009年11期

3 孔曉霞;張宏宇;陳兆琴;范小芳;龔永生;;抑制Beclin 1促進(jìn)H_2O_2誘導(dǎo)的神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞凋亡[J];生理學(xué)報;2011年03期

本文編號：2401160