【摘要】：研究背景 全球每年約有7%的普通人群飽受慢性疼痛的折磨，嚴(yán)重影響著患者的生活質(zhì)量。但由于對(duì)慢性疼痛的具體發(fā)生發(fā)展機(jī)制迄今仍未完全闡明，因此導(dǎo)致對(duì)其的臨床治療也缺乏突破。近年來(lái)，越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)脊髓背角的星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞活化及炎性因子的釋放都與慢性疼痛的發(fā)生和發(fā)展有著密切的關(guān)系。因此以膠質(zhì)細(xì)胞活化和炎性反應(yīng)為研究慢性疼痛的新靶點(diǎn)，可能為臨床提供更多更有效的治療方法和新的治藥物。 當(dāng)外周神經(jīng)受到損傷后，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞可以通過(guò)釋放TNF-等炎性因子，改變神經(jīng)遞質(zhì)清除能力，促進(jìn)痛覺(jué)信息的異常放大，，形成痛覺(jué)敏化，通過(guò)抑制膠質(zhì)細(xì)胞的活化，減少促炎因子的釋放則疼痛得到抑制。有研究證實(shí)，使用TNF-的中和抗體或者受體的拮抗劑可以緩解神經(jīng)損傷誘導(dǎo)的慢性疼痛，沙利度胺(Thalidomide, Tha)就是其中之一種。 Tha是一種谷氨酸衍生物，具有很好的抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用。有研究表明，Tha可以選擇性地抑制單核巨噬細(xì)胞分泌TNF-，同時(shí)促進(jìn)TNF-的降解而發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用。最近的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)論已經(jīng)證實(shí)了Tha可以緩解外周神經(jīng)系統(tǒng)損傷所導(dǎo)致的慢性疼痛，然而，其參與慢性疼痛的鎮(zhèn)痛機(jī)制尚不完全清楚。 綜上，本課題以Tha為工具藥，研究其對(duì)兩種慢性疼痛即神經(jīng)病理性痛和炎性痛是否有鎮(zhèn)痛作用、發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用的方式、預(yù)防和治療的時(shí)間窗以及其發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用的膠質(zhì)細(xì)胞和炎性因子相關(guān)機(jī)制，為進(jìn)一步闡明慢性疼痛的相關(guān)發(fā)生機(jī)制和臨床治療慢性疼痛提供理論依據(jù)。 研究方法 本課題分別通過(guò)實(shí)驗(yàn)大鼠脊神經(jīng)結(jié)扎和足底注射福爾馬林的方法制作神經(jīng)病理性痛和炎性疼痛動(dòng)物模型；通過(guò)行為藥理學(xué)方法觀(guān)察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的熱痛敏反應(yīng)潛伏期和機(jī)械性痛覺(jué)異常反應(yīng)潛伏期；并通過(guò)免疫熒光化學(xué)和Western Blot蛋白定量方法觀(guān)察脊髓背角相關(guān)細(xì)胞和分子在慢性疼痛過(guò)程中的變化，分別在整體動(dòng)物、細(xì)胞以及分子水平研究和觀(guān)察Tha對(duì)慢性痛發(fā)生發(fā)展的作用。 研究結(jié)果 第一部分研究?jī)?nèi)容觀(guān)察到：（1）在SNL模型建立前即腹腔給予Tha（20mg/kg）預(yù)處理后，能明顯的抑制由SNL介導(dǎo)的大鼠機(jī)械性痛；（2）在SNL模型建立后第3、5、7、14d分別Tha（20mg/kg）干預(yù)能顯著提高大鼠的機(jī)械性縮足閾值；（3）在坐骨神經(jīng)結(jié)扎（Spinal nerve ligation, SNL）模型建立后不同時(shí)間點(diǎn)（0、3、7、14d）大鼠手術(shù)側(cè)脊髓背角的GFAP和Iba1比假手術(shù)組表達(dá)量明顯增多，但各時(shí)間點(diǎn)腹腔給予Tha（20mg/kg）膠質(zhì)原纖維酸性蛋白（GFAP）和離子鈣結(jié)合銜接分子1（Iba1）表達(dá)量減少；（4）Western blot結(jié)果顯示SNL所致的神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓背角腫瘤壞死因子-（TNF-）分子在術(shù)后3～14d表達(dá)增多，然而給予Tha干預(yù)后，表達(dá)量則明顯減少。 第二部分研究?jī)?nèi)容觀(guān)察到：（1）大鼠足底皮下注射5%福爾馬林50μl后，能引起典型的雙時(shí)相（phaseⅠ、phase Ⅱ）自發(fā)痛行為，第一時(shí)相是福爾馬林注射后直接由機(jī)械性刺激損傷組織而引起的急性疼痛，隨后會(huì)出現(xiàn)一個(gè)持續(xù)超過(guò)40min慢反應(yīng)過(guò)程稱(chēng)第二時(shí)相，是由注射的福爾馬林引起的炎癥反應(yīng)而導(dǎo)致的持續(xù)疼痛；（2）模型建立前2h經(jīng)灌胃給予布洛芬（20mg/kg）和不同劑量的Tha（10、20、30mg/kg）干預(yù)后能夠明顯的抑制福爾馬林介導(dǎo)的大鼠第一時(shí)相和第二時(shí)相的痛行為，布洛芬與各沙利度胺治療組之間沒(méi)有明顯區(qū)別；（3）福爾馬林注射組的脊髓背角內(nèi)，Iba1陽(yáng)性小膠質(zhì)細(xì)胞、P物質(zhì)（SP）陽(yáng)性終末以及FOS蛋白的表達(dá)量均增多，而給予不同劑量（10、20、30mg/kg）的Tha處理組與0.9%生理鹽水治療對(duì)照組相比表達(dá)量呈明顯的下降趨勢(shì)；（4）福爾馬林注射組大鼠中腦導(dǎo)水管周?chē)屹|(zhì)(Periaqueductalgray，PAG)腹外側(cè)區(qū)、前扣帶回皮質(zhì)（Anterior cingulate cortex，ACC）、島葉皮質(zhì)（Insular cortex，IC）、前額葉皮質(zhì)（Prefrontal cortex，PFC）等區(qū)域，均有大量的FOS陽(yáng)性神經(jīng)元表達(dá)，然而沙利度胺（20mg/kg）治療組同一區(qū)域內(nèi)的FOS陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)量明顯下降；（5）正常對(duì)照組的Ibal陽(yáng)性小膠質(zhì)細(xì)胞為靜息狀態(tài)，主要呈細(xì)長(zhǎng)、分枝狀的細(xì)胞，LPS+生理鹽水組的Ibal陽(yáng)性小膠質(zhì)細(xì)胞為激活狀態(tài)，細(xì)胞體積增大、變?yōu)閳A形，甚至呈阿米巴樣的細(xì)胞，而Tha干預(yù)可以減輕LPS刺激對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)的影響，使激活狀態(tài)的細(xì)胞數(shù)量明顯減少；（6）LPS+生理鹽水組的GFAP陽(yáng)性細(xì)胞較正常對(duì)照組相比，細(xì)胞胞體變大，突起回縮；而Tha干預(yù)可以減輕LPS刺激對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)的影響；（7）與正常對(duì)照組相比，LPS+生理鹽水組TNF-、白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）和白介素-10（IL-10）的表達(dá)明顯增多，而Tha干預(yù)可以降低TNF-、IL-1β、和IL-6的表達(dá)量，但對(duì)IL-10的表達(dá)卻沒(méi)有明顯影響。 小結(jié) 本研究通過(guò)動(dòng)物模型模擬了臨床常見(jiàn)的兩種慢性疼痛，即神經(jīng)病理性痛和炎性痛，兩者的發(fā)生機(jī)制都有膠質(zhì)細(xì)胞及其相關(guān)的細(xì)胞因子引起的神經(jīng)免疫應(yīng)答反應(yīng)參與其中。應(yīng)用Tha可以預(yù)防和緩解上述兩種慢性疼痛，同時(shí)抑制膠質(zhì)細(xì)胞激活，還可以下調(diào)神經(jīng)免疫應(yīng)答反應(yīng)。這些研究結(jié)論為臨床治療慢性疼痛提供了新的理論依據(jù)和治療策略。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R741

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 ;Effects of thalidomide on angiogenesis and tumor growth and metastasis of human hepatocellular carcinoma in nude mice[J];World Journal of Gastroenterology;2005年02期

本文編號(hào)：2400333