大鼠骨髓源神經(jīng)干細胞向血管內皮細胞樣細胞分化的實驗研究
[Abstract]:Aim: to investigate the differentiation of SD rat bone marrow derived neural stem cells (bone marrow mesenchymal stem cells-derived neural stem cells,BMSCs-NSCs) into endothelioid cells (endothelial-like cells,ELCs) in cultured vascular endothelial cells (vascular endothelial cells,VEC). Methods: the bone marrow of bilateral femur, tibia and humerus were isolated and cultured by whole bone marrow culture method. The adherent growth characteristics of bone marrow derived stromal cells (bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs) and the purification of the bone marrow derived stem cells (bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs) were obtained. The shape change of BMSCs was studied and the growth curve of P3 (Passage 3) generation cells was plotted. The optimal inoculation density of BMSCs was discussed. The expression of BMSCs marker CD34,CD44,CD45,CD90 was detected by flow cytometry. The P3 passage BMSCs was digested to form a single cell suspension, and the cell density was adjusted and then cultured in a neural stem cell (neural stem cells,NSCs (20ng/mL bFGF,20ng/mL EGF,B27) induction medium. The expression of CD133,Nestin was observed by immunocytochemical staining. The cultured neurospheres were digested to form single cells and the expression of CD31,vWF on the surface of VEC was detected by immunocytochemical staining. The obtained NSCs suspension was cultured in Matrigel glial medium to observe whether the vascular lumen structure was formed. Results: in the early stage of 1.BMSCs, the cells grew in clusters and the cells were fusiform. P3 BMSCs flow cytometry showed that the ratio of CD44 positive cells was 91.4 and that of CD90 positive cells was 93.7. The expression of CD34,CD45 was negative. The growth curve of 2.P3 cells was "S" type, and the best density of 2.P3 was "mulberry" globular structure after 1-2 days of incubation with 5 脳 10 ~ 4 ~ 1 脳 105/mL.3.BMSCs. Immunocytochemical staining showed that the expression of CD133,Nestin was positive. 4. 4. When cultured in VEC medium for 7 days, the cells were flattened, triangular or polygonal, and looked like paving stones. The lumen like structure can be formed in Matrigel colloid medium. Conclusion: 1. Rat BMSCs could be induced to differentiate into NSCs.2.BMSCs-NSCs by serum-free suspension culture in vitro, and could be induced to differentiate into ELCs, in vitro. The tubular structure could be formed in Matrigel gel.
【學位授予單位】：青海大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R741
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，本文編號：2365041
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